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姜大磊木虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】DNase 1酶切DNA形成片段体系和方法
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我做的是回收DNA酶切小片段，用的是DNase酶切，但是几次下来跑电泳都没有出来小片段，一点条带都没有，酶切体系是（模版，buffer（带有镁离子），DNase 1 DD水） 请高手指教，感激万分 |
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。。。。。。无语了，你是在做DNA shuffling 么？ 这个我做过的，我也是用的Takara的 DNase I ，我的PCR产物是1194bp。 用的体系就是我给你描述的那个： 16度酶切，200ul体系，其中含有8ul稀释100被后的酶。PCR产物的量要足，至少要 5ug。反应时间结束后，加入10mM终浓度的EDTA，95度失活（这个不会有影响的， 拿出来室温放置时会自动复性的）。然后跑胶2%。切胶回收。 你可以下篇文献看看，最早做DNA shuffling 的发表在nature上面的文献。WP Stemmer 的作者，1994年的。DNA shuffling by random fragmentation and reassembly |
13楼2010-01-21 12:30:44
brightfuture01
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2楼2010-01-16 10:57:43
姜大磊
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4楼2010-01-17 21:23:53
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5楼2010-01-17 22:53:15