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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教质粒PCR跑不出目的条带的原因
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wmy712100

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】请教质粒PCR跑不出目的条带的原因

我的试验是：链接转化后，进行蓝白斑筛选，挑取单菌进行菌落PCR后电泳检测得到我的目的条带为1014bp,然后摇菌，使用天根的质粒小提试剂盒提取质粒后,将质粒稀释100倍，取1ul进行质粒PCR,PCR的条件和菌落PCR条件一样，都进行40个循环，结果却只在100bp有一条带，却没有我的目的条带。
请各位高手帮忙分析一下原因。谢谢。
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1楼 2010-01-15 22:09:32
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85715623

木虫 (正式写手)
★ ★
wmy712100(金币+2):谢谢参与
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-16 10:57
对，很可能就是连接反应没成功。可以把质粒电泳一下，看看与ck有什么区别，没有的话就重新连接吧。PCR产物浓度也是一个很关键的因素。
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7楼2010-01-16 10:45:21
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
wmy712100(金币+2):谢谢参与
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-16 10:56
已经质粒回收了，建议酶切检测，比PCR简单，还可靠
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2楼2010-01-15 22:12:23
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wmy712100

铁虫 (初入文坛)
谢谢。我也想做酶切，可老板不舍得花钱买酶，只让做PCR,所以必须PCR做出来，才让送出去测序。
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3楼2010-01-15 22:19:02
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pengl001

木虫 (小有名气)
★ ★
wmy712100(金币+2):谢谢参与
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-16 10:56
I come croos the same problem,and I want to use enzyme but my boss care a lot for money,I have to do PCR over again and again
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Yes,Ican!
4楼2010-01-16 00:48:11
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