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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR目的带弱，多次试验结果一样
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gn2003_0

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR目的带弱，多次试验结果一样

求助高手关于PCR的问题。我做的是转基因植物的PCR检测，CTAB微量提取DNA作为模板。 每次PCR结果都是目的基因条带很弱几乎看不到，在泳道最前端有很亮的条带。
    重复好几次都是如此，设计引物TM=60℃左右，我已经尝试改变退火温度，结果改进不大。期待高手指教~
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1楼 2010-01-15 20:11:28
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lupeng1986

银虫 (小有名气)

引物二聚体

★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3,VIP+0): 1-15 20:32
最前端有很亮的条带有可能是引物二聚体
查查是不是引物的问题
另外，你最好把你用的试剂和PCR体系程序发上来，有DNA序列也可以要大家帮忙你设计对引物
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2楼2010-01-15 20:27:02
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1,VIP+0): 1-16 12:35
换效率高一点的酶试试，做个touchdown也比较有效，加点镁离子试试
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3楼2010-01-15 21:45:18
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
1949stone(金币+0,VIP+0):? 1-16 12:35
对了，加一点二甲亚砜，针对这种情况可能会有所改善
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4楼2010-01-15 21:47:40
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陈思容

铜虫 (正式写手)
★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0): 1-15 22:30
热启动，模板变性后再加入聚合酶！模版的纯度、模板在反应体系中的浓度！
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5楼2010-01-15 22:13:22
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pengl001

木虫 (小有名气)
★ ★
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1949stone(金币+1,VIP+0): 1-16 12:35
I suggest you make a gradient PCR for annealing temperature!
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Yes,Ican!
6楼2010-01-16 00:50:48
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫
★ ★
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1949stone(金币+1,VIP+0): 1-18 09:59
逐步降低非特异性因素，如dNTP、镁、taq的量排除非特异性因素。
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梦在路就在！
7楼2010-01-16 14:36:04
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沙中清泉

木虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-18 09:59
可能是引物的问题
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8楼2010-01-16 14:41:25
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★
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1949stone(金币+1,VIP+0): 1-18 09:59
同意引物设计不太好 生成二聚体太严重
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
9楼2010-01-17 16:33:41
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0): 1-18 09:59
引物二聚体带很亮，也许正是引物有问题吧。不过可以首先应该做个模板的梯度，退火温度也许不用，因为什么也没有扩出来主要原因应该不是它。
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10楼2010-01-17 22:12:35
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