| 查看: 732 | 回复: 6 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
gn2003_0金虫 (小有名气)
|
[交流]
【分享】基因组DNA质量检测
|
||
|
一、 技术方法 对于基因组DNA质量检测主要包括：基因组DNA片段大小的确定，基因组DNA浓度的测定，基因组DNA纯度的测定三方面。 用到的技术方法有：琼脂糖凝胶电泳，使用紫外分光光度计测定基因组DNA溶液的OD值 二、 试剂 琼脂糖 溴化乙锭（终浓度0.5μg/ml） 6×上样缓冲溶液 λDNA溶液（50ng/μl） 三、 仪器 电泳仪 凝胶成像仪 紫外分光光度计 四、 操作流程 1. 琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA片段的大小 制作浓度为0.5%（w/v）的琼脂糖胶。 依次取1μl、2μl DNA溶液，混合6×上样缓冲溶液均匀，上样。 同时点λDNA溶液1μl或2μl作为Marker。 1-2V/cm电泳约12-16h。 2. 使用紫外分光光度计测定基因组DNA溶液的OD值 对DNA溶液样品进行稀释，一般稀释百倍。 取DNA稀释液测定OD260与OD280。 按1 OD260=50ng/μl计算基因组DNA原液的浓度，即50×OD260 ×稀释倍数。 计算OD260/OD280值。 五、 注意事项 1.λDNA约48kb，用来指示所提DNA的大小。一般要求所提DNA大小在50kb以上。 2. DNA的纯制品的OD260/OD280值为1.8，而RNA的纯制品的OD260/OD280值为2.0。若OD260/OD280值高于1.8，那么说样品中可能有RNA的污染；若样品中蛋白或酚的污染较严重则OD260/OD280值低于上述两个值。 3.用紫外分光光度计测量OD值时，应控制读数在0.01-2之间，即DNA的稀释倍数要适当。 4. 紫外分光光度计法适应浓度较高并且较纯的样品的定量。核酸在260nm处的吸收非常强，只有存在高水平蛋白污染的情况下才会引起260nm、280nm两个波长下吸光度比值的大幅度改变。因此如果A260/A280值低于1.8，那么就不能通过此法对DNA样品进行精确定量。 参考文献 1．[美]J.萨姆布鲁克,D.W.拉塞尔著,黄培堂等译.分子克隆实验指南(第三版).北京:科学出版社,2002.8. |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有119人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
gn2003_0
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 742.1
- 散金: 10
- 帖子: 216
- 在线: 12.5小时
- 虫号: 796263
- 注册: 2009-06-17
- 性别: GG
- 专业: 细胞生物学
7楼2010-01-16 21:01:49
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
2楼2010-01-15 17:04:26
gn2003_0
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 742.1
- 散金: 10
- 帖子: 216
- 在线: 12.5小时
- 虫号: 796263
- 注册: 2009-06-17
- 性别: GG
- 专业: 细胞生物学
3楼2010-01-15 17:11:00
jasco
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 1626.1
- 红花: 3
- 帖子: 991
- 在线: 82小时
- 虫号: 287776
- 注册: 2006-10-21
- 专业: 生物化学
4楼2010-01-15 17:56:23
20