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gn2003_0金虫 (小有名气)
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【分享】基因组DNA质量检测
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一、 技术方法 对于基因组DNA质量检测主要包括：基因组DNA片段大小的确定，基因组DNA浓度的测定，基因组DNA纯度的测定三方面。 用到的技术方法有：琼脂糖凝胶电泳，使用紫外分光光度计测定基因组DNA溶液的OD值 二、 试剂 琼脂糖 溴化乙锭（终浓度0.5μg/ml） 6×上样缓冲溶液 λDNA溶液（50ng/μl） 三、 仪器 电泳仪 凝胶成像仪 紫外分光光度计 四、 操作流程 1. 琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA片段的大小 制作浓度为0.5%（w/v）的琼脂糖胶。 依次取1μl、2μl DNA溶液，混合6×上样缓冲溶液均匀，上样。 同时点λDNA溶液1μl或2μl作为Marker。 1-2V/cm电泳约12-16h。 2. 使用紫外分光光度计测定基因组DNA溶液的OD值 对DNA溶液样品进行稀释，一般稀释百倍。 取DNA稀释液测定OD260与OD280。 按1 OD260=50ng/μl计算基因组DNA原液的浓度，即50×OD260 ×稀释倍数。 计算OD260/OD280值。 五、 注意事项 1.λDNA约48kb，用来指示所提DNA的大小。一般要求所提DNA大小在50kb以上。 2. DNA的纯制品的OD260/OD280值为1.8，而RNA的纯制品的OD260/OD280值为2.0。若OD260/OD280值高于1.8，那么说样品中可能有RNA的污染；若样品中蛋白或酚的污染较严重则OD260/OD280值低于上述两个值。 3.用紫外分光光度计测量OD值时，应控制读数在0.01-2之间，即DNA的稀释倍数要适当。 4. 紫外分光光度计法适应浓度较高并且较纯的样品的定量。核酸在260nm处的吸收非常强，只有存在高水平蛋白污染的情况下才会引起260nm、280nm两个波长下吸光度比值的大幅度改变。因此如果A260/A280值低于1.8，那么就不能通过此法对DNA样品进行精确定量。 参考文献 1．[美]J.萨姆布鲁克,D.W.拉塞尔著,黄培堂等译.分子克隆实验指南(第三版).北京:科学出版社,2002.8. |
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