24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 553  |  回复: 4
当前主题已经存档。

tangqiaoling

[交流] 【求助/交流】引物设计问题

本人欲扩增某一物种的线粒体基因组,但到目前为止在NCBI上搜索到与该物种相近的物种的线粒体仅2种(亲缘关系不是最近),且比对他们的同源性仅75%左右,且同源的碱基排列是间隔的,不存在10个碱基以上的同源性序列,请问各位大虾,这样该如何设计引物?谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
相近到什么程度?属?科?
表述不清很难回答的。
海纳百川止于至善
2楼2010-01-13 22:59:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
10个就够了,设计简并引物,尽量将简并区域设计到5‘端,3’端尽量保守,简并度不要太高,尽量不超过16,跑出条带(可能多条)后切胶回收目的条带,测序,重新设计特异性引物

简并引物不是很容易找到目的条带,可以设计巢式PCR,巢式的结果一般会扩增出目的条带,因为基因组中,两段引物都符合的位点很少,基本上能扩增出来就是目的片段了
3楼2010-01-14 10:03:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxy7576

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-01-14 10:03:47:
10个就够了,设计简并引物,尽量将简并区域设计到5‘端,3’端尽量保守,简并度不要太高,尽量不超过16,跑出条带(可能多条)后切胶回收目的条带,测序,重新设计特异性引物

简并引物不是很容易找到目的条带, ...

学习了~谢谢~
不论什么时候,什么处境,都不要忘记自己最初的梦想!
4楼2010-01-29 21:45:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kit256


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
简并引物,巢式pcr。没有别的办法。
5楼2010-01-31 22:41:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tangqiaoling 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 有没有学校材料专业收跨调(一志愿085410) +6 momo(上岸版) 2026-04-06 9/450 2026-04-11 22:38 by wj165256
[考研] 291求调剂 +5 关忆北. 2026-04-11 5/250 2026-04-11 21:21 by lbsjt
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 11/550 2026-04-11 19:57 by 逆水乘风
[考研] 求调剂 +13 雪逢冬 2026-04-10 13/650 2026-04-11 09:58 by 猪会飞
[考研] 085404 298分求调剂 +10 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 11/550 2026-04-10 16:44 by wangy0907
[考研] 301求调剂 +6 静静想想 2026-04-05 6/300 2026-04-10 09:15 by Delta2012
[考研] 材料专硕初试分332一志愿西北工业大学, +12 故人?? 2026-04-09 12/600 2026-04-09 18:34 by Ccclqqq
[考研] 085600材料与化工专硕329 求调剂 +24 额cc 2026-04-06 25/1250 2026-04-09 16:01 by wp06
[考研] 322求调剂,08工科 +3 今天是个小号 2026-04-08 3/150 2026-04-09 15:53 by wp06
[考研] 308求调剂 +17 墨墨漠 2026-04-06 17/850 2026-04-09 09:25 by 壹往無前
[考研] 求助071001调剂!!! +7 黄守松 2026-04-05 8/400 2026-04-09 09:07 by 徐良白眉大侠
[考研] 一志愿哈工大,初试329,求环境科学与工程调剂! +11 余未辛 2026-04-06 11/550 2026-04-08 15:21 by screening
[考研] 304求调剂 +16 c297914 2026-04-05 17/850 2026-04-08 13:00 by grayjzr
[考研] 求调剂 +15 熊二想上岸 2026-04-06 15/750 2026-04-08 04:53 by 无际的草原
[考研] 316求调剂 +4 15318418673 2026-04-07 4/200 2026-04-07 22:12 by hemengdong
[考研] 292求调剂 +4 lilllllxccc 2026-04-05 5/250 2026-04-07 09:29 by 纺大杨老师
[考研] (调剂)一志愿报考哈尔滨工业大学0857资源与环境专业378分考生 +7 狠狠加油 2026-04-05 8/400 2026-04-06 16:52 by momo皓
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +5 崔wj 2026-04-05 5/250 2026-04-06 15:40 by lin-da
[考研] 315求调剂 +5 &123456789 2026-04-05 5/250 2026-04-05 19:55 by nepu_uu
[考研] 工科277分求调剂材料 +8 上了上了上哦 2026-04-05 9/450 2026-04-05 13:05 by wwytracy
信息提示
请填处理意见