应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR条带问题----请高人指点
汕头大学海洋科学接受调剂
101/1返回列表
查看: 732  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

tangqiaoling

[交流] 【求助/交流】PCR条带问题----请高人指点

我最近跑的PCR老师出现不同条带的问题，，比如在同样的样品，同样的PCR条件下，上午跑的和下午跑的观察到的条带总是不一样，上午的的条带在1200bp左右，儿下午的却在1800bp，其他一切情况都一样，不知问题出在哪里，请高人指点一下！谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-01-12 21:44:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沙中清泉

木虫 (正式写手)
跑的时间呢？
回复此楼
2楼2010-01-12 21:55:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangqiaoling

引用回帖:
Originally posted by 沙中清泉 at 2010-1-12 21:55:
跑的时间呢？

延伸时间都是一样长的
赞一下 回复此楼
3楼2010-01-12 22:27:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qinghuaihulu

铁虫 (小有名气)

建议换新的电泳液

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果多次重复都是这样，我建议你下午跑胶的时候换新的电泳液试试
赞一下(1人) 回复此楼
vanilla
4楼2010-01-13 11:25:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这可能与你的加样量有关，你把加样量适当的降低一下，条带太宽了不太好看，你可以把你两次做的同时跑胶，然后时间跑的时间长点 看看吧
赞一下(1人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
5楼2010-01-13 12:03:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
每次都用相同的marker么？
我不认为是跑电泳的问题。
你是不是在冰上做混合？PCR的初始扩增决定了终产物的片段。
问题可能由于初始随机扩增引起的。可能（？）存在假引物。
建议touchdown。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-01-13 13:26:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryqpr

木虫 (正式写手)

小猪亲点的老公
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
问电泳问题麻烦贴图
这样子才比较好判断。
另外2楼问的跑的时间 不是说延伸时间 而是问你电泳时间
赞一下(1人) 回复此楼
铁杵可以磨成针,木杵只能磨成牙签,有些事情不是努力可以改变的.
7楼2010-01-13 16:34:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangqiaoling

感谢各位的回帖，谢谢！
赞一下 回复此楼
8楼2010-01-13 22:27:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

axiaoru

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-1-13 13:26:
每次都用相同的marker么？
我不认为是跑电泳的问题。
你是不是在冰上做混合？PCR的初始扩增决定了终产物的片段。
问题可能由于初始随机扩增引起的。可能（？）存在假引物。
建议touchdown。

请教一下什么东西里会出现假引物？我现在扩1个月了，带老是弥散，而且每次程度不同。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-01-14 09:01:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by axiaoru at 2010-1-14 09:01:

请教一下什么东西里会出现假引物？我现在扩1个月了，带老是弥散，而且每次程度不同。

假引物的来源是引物设计本身的问题，就是说你的引物和模版的其他位置可以配对，扩增出非目的片段。也就是说是引物本身存在一定缺陷，但这种缺陷一般来说并不是致命的，你可以通过且胶回收的方法提纯目的片段。
弥散带一般是引物退火温度不合适或者你需要重新设计引物。可以做touchdown 或者设计巢式。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-01-14 09:37:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tangqiaoling 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组 +21 hualkop 2026-04-12 22/1100 2026-04-14 17:44 by lhj2009
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +6 喽哈加油 2026-04-13 6/300 2026-04-14 16:40 by zhouxiaoyu
[考研] 求调剂 +20 MAX怅惘 2026-04-09 22/1100 2026-04-14 14:57 by 独醉梦孤城
[考研] 302求调剂 +10 易！? 2026-04-13 10/500 2026-04-13 19:04 by lbsjt
[考研] 一志愿西交机械专硕求调剂 +9 求上岸的小王 2026-04-10 9/450 2026-04-13 16:08 by jiangguiquan11
[考研] 材料复试求调剂 +24 xhhdjdjsjks 2026-04-09 24/1200 2026-04-13 15:49 by 幸免 ..
[考研] 一志愿0807 数一英一 313 有没有二轮调剂 +12 emokidd 2026-04-08 13/650 2026-04-13 08:32 by lhj2009
[考研] 0831生医工第一轮调剂失败求助 +12 小熊睿睿_s 2026-04-11 16/800 2026-04-12 16:28 by 钰璞
[考研] 085410 273求调剂 +10 X1999 2026-04-09 10/500 2026-04-12 09:24 by 逆水乘风
[找工作] 山东高校教师考核超级无底线，员工过不下去啦 +4 qut2026 2026-04-09 9/450 2026-04-12 00:54 by qut2026
[考研] 296求调剂 +14 汪！？！ 2026-04-08 15/750 2026-04-11 20:28 by dongdian1
[考研] 275求调剂 +9 1624447980 2026-04-08 10/500 2026-04-11 10:20 by Delta2012
[考研] 293求调剂 +6 勇远库爱314 2026-04-08 6/300 2026-04-11 10:08 by zhq0425
[考研] 085506-求调剂-285分 +3 雷欧飞踢 2026-04-08 3/150 2026-04-11 08:37 by zhq0425
[考研] 调剂 化学 307 +21 73372112 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 23:53 by wj165256
[论文投稿] mdpi小修rvr时间四五天了 20+3 哈哈high 2026-04-08 5/250 2026-04-10 16:02 by 北京莱茵润色
[考研] 一志愿沪9，326生物学求相关专业调剂 +4 刘墨墨 2026-04-09 4/200 2026-04-10 12:07 by pengliang8036
[考研] 本科西工大 0856 324求调剂 +10 wysyjs25 2026-04-09 11/550 2026-04-10 08:37 by 5268321
[考研] 085404，334分，求调剂 +5 sunjie8888 2026-04-08 8/400 2026-04-09 07:26 by sunjie8888
[考研] 331求调剂 +5 luoxin0706. 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:15 by zhouyuwinner
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭