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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR条带问题----请高人指点
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tangqiaoling

[交流] 【求助/交流】PCR条带问题----请高人指点

我最近跑的PCR老师出现不同条带的问题，，比如在同样的样品，同样的PCR条件下，上午跑的和下午跑的观察到的条带总是不一样，上午的的条带在1200bp左右，儿下午的却在1800bp，其他一切情况都一样，不知问题出在哪里，请高人指点一下！谢谢！
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1楼 2010-01-12 21:44:45
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沙中清泉

木虫 (正式写手)
跑的时间呢？
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2楼2010-01-12 21:55:19
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tangqiaoling

引用回帖:
Originally posted by 沙中清泉 at 2010-1-12 21:55:
跑的时间呢？

延伸时间都是一样长的
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3楼2010-01-12 22:27:48
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qinghuaihulu

铁虫 (小有名气)

建议换新的电泳液

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果多次重复都是这样，我建议你下午跑胶的时候换新的电泳液试试
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vanilla
4楼2010-01-13 11:25:03
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
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这可能与你的加样量有关，你把加样量适当的降低一下，条带太宽了不太好看，你可以把你两次做的同时跑胶，然后时间跑的时间长点 看看吧
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
5楼2010-01-13 12:03:13
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
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每次都用相同的marker么？
我不认为是跑电泳的问题。
你是不是在冰上做混合？PCR的初始扩增决定了终产物的片段。
问题可能由于初始随机扩增引起的。可能（？）存在假引物。
建议touchdown。
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6楼2010-01-13 13:26:33
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jerryqpr

木虫 (正式写手)

小猪亲点的老公
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
问电泳问题麻烦贴图
这样子才比较好判断。
另外2楼问的跑的时间 不是说延伸时间 而是问你电泳时间
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铁杵可以磨成针,木杵只能磨成牙签,有些事情不是努力可以改变的.
7楼2010-01-13 16:34:28
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tangqiaoling

感谢各位的回帖，谢谢！
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8楼2010-01-13 22:27:34
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axiaoru

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-1-13 13:26:
每次都用相同的marker么？
我不认为是跑电泳的问题。
你是不是在冰上做混合？PCR的初始扩增决定了终产物的片段。
问题可能由于初始随机扩增引起的。可能（？）存在假引物。
建议touchdown。

请教一下什么东西里会出现假引物？我现在扩1个月了，带老是弥散，而且每次程度不同。
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9楼2010-01-14 09:01:53
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by axiaoru at 2010-1-14 09:01:

请教一下什么东西里会出现假引物？我现在扩1个月了，带老是弥散，而且每次程度不同。

假引物的来源是引物设计本身的问题，就是说你的引物和模版的其他位置可以配对，扩增出非目的片段。也就是说是引物本身存在一定缺陷，但这种缺陷一般来说并不是致命的，你可以通过且胶回收的方法提纯目的片段。
弥散带一般是引物退火温度不合适或者你需要重新设计引物。可以做touchdown 或者设计巢式。
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10楼2010-01-14 09:37:19
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