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tangqiaoling

[交流] 【求助/交流】PCR条带问题----请高人指点

我最近跑的PCR老师出现不同条带的问题,,比如在同样的样品,同样的PCR条件下,上午跑的和下午跑的观察到的条带总是不一样,上午的的条带在1200bp左右,儿下午的却在1800bp,其他一切情况都一样,不知问题出在哪里,请高人指点一下!谢谢!
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axiaoru


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Originally posted by yujiaping1 at 2010-1-13 13:26:
每次都用相同的marker么?
我不认为是跑电泳的问题。
你是不是在冰上做混合?PCR的初始扩增决定了终产物的片段。
问题可能由于初始随机扩增引起的。可能(?)存在假引物。
建议touchdown。

请教一下什么东西里会出现假引物?我现在扩1个月了,带老是弥散,而且每次程度不同。
9楼2010-01-14 09:01:53
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tangqiaoling

引用回帖:
Originally posted by 沙中清泉 at 2010-1-12 21:55:
跑的时间呢?

延伸时间都是一样长的
3楼2010-01-12 22:27:48
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qinghuaihulu

铁虫 (小有名气)

建议换新的电泳液


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如果多次重复都是这样,我建议你下午跑胶的时候换新的电泳液试试
vanilla
4楼2010-01-13 11:25:03
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主


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这可能与你的加样量有关,你把加样量适当的降低一下,条带太宽了不太好看,你可以把你两次做的同时跑胶,然后时间跑的时间长点 看看吧
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
5楼2010-01-13 12:03:13
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