| 查看: 1249 | 回复: 6 | |||||
| 当前主题已经存档。 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
[交流]
【求助/交流】枯草芽孢杆菌的转化
|
|||||
| 急求:枯草芽孢杆菌的转化方法,请各位虫友们不吝赐教,本人不胜感激!(最好是已经成功的实验方法,谢谢)!再次感谢! |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白表达纯化鉴定精华 | 枯草芽孢 |
» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有199人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
gxsulong
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 20061.3
- 散金: 24
- 红花: 1
- 沙发: 1
- 帖子: 2355
- 在线: 259.3小时
- 虫号: 115084
- 注册: 2005-11-24
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
3楼2010-01-08 17:41:31
gxsulong
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 20061.3
- 散金: 24
- 红花: 1
- 沙发: 1
- 帖子: 2355
- 在线: 259.3小时
- 虫号: 115084
- 注册: 2005-11-24
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+5,VIP+0): 1-8 17:55
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+5,VIP+0): 1-8 17:55
|
这个我用过，效果还不错。 枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备方法 1、菌种在斜面培养2天，孢子形成率接近100%。 2、接于5ml GMⅠ溶液，在30℃慢摇床（100rpm）振荡培养过夜。 3、次日取2ml转接到18ml GMⅠ中，37℃快摇床（200rpm）培养3.5小时。 4、再取10ml转接到90ml GMⅡ中，37℃慢摇床培养90分钟，离心收集菌体。 5、用10ml上清液悬浮菌体，并加30%的灭菌甘油至10%，混匀后分装到离心管中（0.5ml/Tube），随即放到-70℃保存。 6、转化时取出离心管，放在45℃水浴中溶化，然后在0.5ml菌液中加入适量DNA（1ug/ml）。 7、于37℃缓慢振荡（80rpm）保温30分钟后涂抗性平板，再在37℃培养过夜，次日检查转化子。 【培养基配方】 1.10×最低盐溶液：K2HPO4 14g（K2HPO4.3H2O 18.34g），KH2PO4 6g，(NH4)2SO4 2g，柠檬酸钠（Na3C6H5O7.2H2O）1g，MgSO4.7H2O 0.2g，在蒸馏水中依次溶解，加水至100ml。 2.L- trp溶液，2mg/ml，贮于棕色瓶内，113℃灭菌30min，用黑纸包裹。 3.GMⅠ溶液：1×最低盐溶液95ml，50%葡萄糖1ml，5%水解酪蛋白0.4ml，10%酵母汁1ml，2mg/ml L- trp 2.5ml（50ug/ml）。 4.GMⅡ溶液：1×最低盐溶液97.5ml，50%葡萄糖1ml，5%水解酪蛋白0.08ml，10%酵母汁0.04ml，0.5M MgCl2 0.5ml(2.5mM)，0.1M CaCl2 0.5ml(0.5mM)，2mg/ml L- trp 0.5ml（5ug/ml）。 |
2楼2010-01-08 17:39:56
4楼2010-01-11 09:21:25
5楼2010-01-20 11:22:55