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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重组载体构建
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】重组载体构建

各位虫友，鄙人想构建一个重组载体，用于原核表达，启动子和报告基因都要自己插入到载体中。请问是不是必须在启动子和报告基因之间加入核糖体结合序列（rbs）？有没有哪位大虾做过这方面的，请给予指点。
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低调务实！
1楼 2010-01-08 10:20:52
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gyesang

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★ ★
更深的蓝(金币+1,VIP+0): 1-8 14:35
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-8 18:24
最好还是加上RBS吧，这样表达的效率会高点，RBS序列也不长，直接修饰在引物上就可以
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2010-01-08 13:27:21
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gyesang at 2010-1-8 13:27:
最好还是加上RBS吧，这样表达的效率会高点，RBS序列也不长，直接修饰在引物上就可以

RBS的设计有什么原则没？有的载体上是AGGAGG，有的是GACGAG等，不会富含G就可以吧。

[ Last edited by 更深的蓝 on 2010-1-8 at 14:45 ]
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低调务实！
3楼2010-01-08 14:37:22
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xiangao

金虫 (正式写手)
★ ★
更深的蓝(金币+2,VIP+0): 1-9 15:54
应该取决于你的启动子序列    NCBI上启动子后面CDS前面应该有一段RBS
不是加不加的问题，是一定要加RBS 否则影响翻译

[ Last edited by xiangao on 2010-1-9 at 11:41 ]
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4楼2010-01-09 11:38:02
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xiangao at 2010-1-9 11:38:
应该取决于你的启动子序列    NCBI上启动子后面CDS前面应该有一段RBS
不是加不加的问题，是一定要加RBS 否则影响翻译

[ Last edited by xiangao on 2010-1-9 at 11:41 ]

我在有些文献中发现，他们的启动子序列中有RBS和起始密码子ATG，如果在启动子后面再加上报告基因，能正确表达出目的蛋白吗？
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低调务实！
5楼2010-01-09 15:58:49
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xiangao

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 更深的蓝 at 2010-1-9 15:58:

我在有些文献中发现，他们的启动子序列中有RBS和起始密码子ATG，如果在启动子后面再加上报告基因，能正确表达出目的蛋白吗？

按理说可以   不过要避免移码突变
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6楼2010-01-09 20:51:58
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gyesang

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更深的蓝(金币+1,VIP+0): 1-11 09:03
引用回帖:
Originally posted by xiangao at 2010-1-9 11:38:
应该取决于你的启动子序列    NCBI上启动子后面CDS前面应该有一段RBS
不是加不加的问题，是一定要加RBS 否则影响翻译

[ Last edited by xiangao on 2010-1-9 at 11:41 ]

最好的方法是，你参考别人的原核表达载体，想pET系列和pQE系列
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
7楼2010-01-10 17:30:13
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