| 查看: 527 | 回复: 5 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
fyw921铜虫 (小有名气)
|
[交流]
【求助/交流】细胞TEM制备中遇到的问题
|
||
|
TEM样品制备观察时细胞全部裂解，只能看到细胞核与离散的细胞器，请大家帮忙分析一下是什么原因使细胞裂解了 谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有258人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
2楼2010-01-07 17:49:02
lzhwin
木虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 1977.1
- 散金: 3
- 红花: 2
- 帖子: 489
- 在线: 58.1小时
- 虫号: 481076
- 注册: 2007-12-17
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
3楼2010-01-07 19:02:13
fyw921
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 90.3
- 散金: 44
- 帖子: 298
- 在线: 64.3小时
- 虫号: 714705
- 注册: 2009-03-04
- 性别: MM
- 专业: 抗体工程学
|
TEM超薄切片制样用PBS（0.2 mol/L）：甲液：0.2 mol/L的磷酸氢 钠溶液： Na2HPO4·12H2O 71.64 g加超纯水溶解并定容至 1000 mL；乙液： 0.2 mo磷酸二氢钠溶液：NaH2PO4·2H2O 31.21 g加超纯水溶解并定容至 1000 mL；甲乙液按 81 : 19 比例混合即得pH值为 7.4 的 0.2 mol/L的磷酸盐缓冲液。清洗固的细胞时用超纯水 1 : 1稀释。 8%多聚甲醛（paraformaldehyde, PFM）：称取 4 g多聚甲醛溶于 45 蒸馏水（ddH2O）中，加热至 60 oC，边搅拌边滴加1 mol/L的氢氧化钠溶液直 多聚甲醛彻底溶解，盐酸调节pH值为 7.2，定容至 50 mL，4 oC避光储存。 2.5%戊二醛固定液：取上述0.2 mol/L的PBS 50 mL，8% PFM 25 m 25%的戊二醛10 mL，混合后加ddH2O定容至 100 mL，4 oC避光储存。 细胞生长至80%，PBS清洗细胞3 次，用细胞刮轻 下细胞，移至eppendoff离心管中，1500 rpm离心 10min，由于离心过程中细胞没离下来重复三次，针头注射器沿管壁吸去上清液。 前固定：立即用吸管将 4 ℃预冷的 2.5%戊二醛固定液沿管壁千万不可将细胞团打散，于 4℃冰箱内固定 4 h。 以后步骤由专门的电镜老师操作，出问题可能在我自己操作的以上两步 |
4楼2010-01-08 09:26:02
lzhwin
木虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 1977.1
- 散金: 3
- 红花: 2
- 帖子: 489
- 在线: 58.1小时
- 虫号: 481076
- 注册: 2007-12-17
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
5楼2010-01-08 13:28:30
6楼2010-01-08 18:04:24