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fyw921铜虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】细胞TEM制备中遇到的问题
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TEM样品制备观察时细胞全部裂解，只能看到细胞核与离散的细胞器，请大家帮忙分析一下是什么原因使细胞裂解了 谢谢！ |
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2楼2010-01-07 17:49:02
lzhwin
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3楼2010-01-07 19:02:13
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TEM超薄切片制样用PBS（0.2 mol/L）：甲液：0.2 mol/L的磷酸氢 钠溶液： Na2HPO4·12H2O 71.64 g加超纯水溶解并定容至 1000 mL；乙液： 0.2 mo磷酸二氢钠溶液：NaH2PO4·2H2O 31.21 g加超纯水溶解并定容至 1000 mL；甲乙液按 81 : 19 比例混合即得pH值为 7.4 的 0.2 mol/L的磷酸盐缓冲液。清洗固的细胞时用超纯水 1 : 1稀释。 8%多聚甲醛（paraformaldehyde, PFM）：称取 4 g多聚甲醛溶于 45 蒸馏水（ddH2O）中，加热至 60 oC，边搅拌边滴加1 mol/L的氢氧化钠溶液直 多聚甲醛彻底溶解，盐酸调节pH值为 7.2，定容至 50 mL，4 oC避光储存。 2.5%戊二醛固定液：取上述0.2 mol/L的PBS 50 mL，8% PFM 25 m 25%的戊二醛10 mL，混合后加ddH2O定容至 100 mL，4 oC避光储存。 细胞生长至80%，PBS清洗细胞3 次，用细胞刮轻 下细胞，移至eppendoff离心管中，1500 rpm离心 10min，由于离心过程中细胞没离下来重复三次，针头注射器沿管壁吸去上清液。 前固定：立即用吸管将 4 ℃预冷的 2.5%戊二醛固定液沿管壁千万不可将细胞团打散，于 4℃冰箱内固定 4 h。 以后步骤由专门的电镜老师操作，出问题可能在我自己操作的以上两步 |
4楼2010-01-08 09:26:02
lzhwin
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5楼2010-01-08 13:28:30
6楼2010-01-08 18:04:24