24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 900  |  回复: 12
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR非特异性扩增,望高手指教

最近一直在做PCR,体系和反应条件换了几次,还是没有出现目的条带,望高手指点迷津!
    我的PCR反应体系:
   10Xbuffer                          2.5ul
   MgCl2(25mmol/L  )        2.0ul
   dNTP(2.5mmol/L  )           1.0ul
   上下游引物(10mmol/L  )各   0.5ul
   Taq酶(5U/ul)              0.5ul
   模板 (真菌基因组DNA)               2.0ul
    加双蒸水至    25ul
PCR反应条件
   94°,10min
   
   94°,1min
   68°,1min
   35cycle

   72°,10min

引物

primer(Oligo6.2):

上游:5' ATGTCCGAGCGACCCTCCGATCTTGTAGTC  3'(30bp)

下游:5' TCACGCCTCTAACATGCCATACTCTTTCTC  3'(30bp)
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1514132

至尊木虫 (著名写手)

上下游引物太少了,可以加到1ul
6楼2010-01-05 20:33:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

陈思容

铜虫 (正式写手)

忘了说了,目的条带830bp,非特异性扩增条带在100-250bp之间,用的是D2000的marker
2楼2010-01-05 17:20:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):降五度 可以做个梯度 1-5 17:45
先将退火温度降低5度试试看
3楼2010-01-05 17:27:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
1949stone(金币+3,VIP+0):谢谢交流 1-5 17:45
94°,3min
   
   94°,30sec
   60°,30sec
   72°,1min

   35cycle

   72°,10min
4楼2010-01-05 17:28:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085801电气专硕272求调剂 +17 电气李 2026-04-13 19/950 2026-04-15 12:47 by 西北望—风沙
[考研] 一志愿沪9,生物学326求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-15 3/150 2026-04-15 11:40 by chixmc
[考研] 材料工程085601,270求调剂 +42 @ASDF1234 2026-04-08 46/2300 2026-04-14 18:12 by 逍遥三郎
[考研] 本科211,报考085601-310分 +16 ararak 2026-04-13 16/800 2026-04-14 14:55 by Delta2012
[基金申请] RY:中国产出的科学垃圾论文,绝对数量和比例都世界第一 +6 zju2000 2026-04-14 17/850 2026-04-14 14:34 by jurkat.1640
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +18 振—TZ 2026-04-10 19/950 2026-04-14 10:34 by screening
[考研] 材料085601调剂 +32 何润采123 2026-04-10 34/1700 2026-04-14 08:47 by 木木mumu~
[考研] 调剂求助 +6 果然有我 2026-04-11 7/350 2026-04-11 16:22 by 明月此时有
[考研] 0859,337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 11:34 by caotw2020
[考研] 283求调剂 +22 那个噜子 2026-04-09 22/1100 2026-04-11 10:41 by 逆水乘风
[考研] 311求调剂 +13 xyp想读书 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:41 by 猪会飞
[考研] 一志愿东北大学控制工程085406数二英二385,求调剂 +8 Ezra_Zhang 2026-04-09 8/400 2026-04-11 09:15 by 猪会飞
[考研] 265求调剂 +12 风说她早忘了 2026-04-10 13/650 2026-04-10 18:56 by chemisry
[考研] 344求调剂 +7 丶风雪夜归人丶 2026-04-09 7/350 2026-04-10 12:05 by pengliang8036
[考研] 一志愿中南大学物理学,英一66,求调剂 +4 长烟旖旎 2026-04-08 5/250 2026-04-10 10:31 by 颖果儿
[考研] 一志愿中科大070300化学,314分求调剂 +12 wakeluofu 2026-04-09 12/600 2026-04-10 09:57 by liuhuiying09
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +9 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-09 10/500 2026-04-09 20:01 by Orcid
[考研] 083200 初试305分 求调剂 暂不考虑跨专业 +15 Claireyyyy 2026-04-09 15/750 2026-04-09 16:11 by zhuimr
[考研] 334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 09:28 by wdyheheeh
[考研] 331求调剂 +5 luoxin0706. 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:15 by zhouyuwinner
信息提示
请填处理意见