Originally posted by 小小豆豆 at 2010-1-5 10:28:
dntp的浓度是多少，一般用混合dntp时，加的量都较少，2微升太多了吧

Originally posted by tianpingpe at 2010-1-5 10:30:
1.检查你的模板有问题没有
2，引物设计是否合理
3.有没有阴性对照，如果有阳性对照更好，保证你的扩增体系没有问题

Originally posted by jasco at 2010-1-5 10:35:
1.一连串10个G不会影响的，除非整个基因序列GC含量高（加GCbuffer）
2.退火温度是这么高么，根据引物设置，或者touchdown
3.延伸温度，很多pfu最佳延伸温度为68度，
4.延伸效率，一般酶都能做到1kb/min，所以2 ...

Originally posted by wangtengxu at 2010-1-5 11:47:
1.上图看看
2.一定要做阳性阴性对照（图）

Originally posted by fungixx at 2010-1-5 11:51:
pfu扩增效率是有点低，也建议用taq plus,保真性挺好的扩增效率也挺高。不知道你的引物序列，很可能是退火温度不合适-----

Originally posted by j2 at 2010-1-5 13:46:
同感，退火温度有点高~~~~

Originally posted by runxiaoli at 2010-1-5 15:12:
你设计引物的Tm值是多少，设计的退火温度一般比它低5-10度。做不出来原因可能：模板不合适，或者引物不合适，建议一开始94度，5分钟，94度，45秒，60-64度，50秒。。。试试。希望楼主早日做出想要的结果，加油啦！