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wangp3102

新虫 (初入文坛)

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引物特异性不好，可能是退火温度太高，建议降低一下退后温度再P一下

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21楼2010-01-20 15:17:49

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gn2003_0

金虫 (小有名气)

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退火温度高点了，设置阳性对照里面有目的带吗？

22楼2010-01-20 15:25:25

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sdspring

金虫 (初入文坛)

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谢谢两位！退火温度将到55度了，还是没结果。

阳性对照，只设了基因组的，没问题。
引物的，因为是从基因组非编码区上扩，不会设对照。有没有人有好建议？

23楼2010-01-21 08:29:20

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松上云雀

木虫 (正式写手)

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你用的哪个公司的酶？
拉长片段，最好用高保真酶，你可以换下酶再试一次，祝你成功。

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24楼2010-01-21 09:15:41

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sdspring

金虫 (初入文坛)

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谢谢楼上！

用的tiangen的普通taq酶与pfu酶。

用没有好用的酶？推荐一下？

25楼2010-01-21 09:42:43

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buster

新虫 (初入文坛)

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或许可以用TAKARA的LA酶试试看对于Taq酶难扩出来的 LA酶可能可以

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26楼2010-01-21 10:21:01

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wgx1128

金虫 (正式写手)

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你的模板确定没有问题吧？
可以适当加点DMSO试试

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选择快乐！

27楼2010-01-21 11:00:32

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