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lfgc8505金虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】载体构建过程中的酶连问题
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请问各位虫友们在构建表达载体的过程中，酶连时有没有出现过酶连失败的情况。 小虫，最近在做表达载体构建，需要将酶切后的载体与目的基因连接起来，再转化，但是就是长不出来克隆。转化应该没问题，因为我每次做阳性对照都能长出很多。载体自连的背景对照也做了，也没长出来。 载体 目的基因比例也做了1比3 、1比5、1比10的。也加大酶量了，20微升体系加2微升的酶，对了我的酶是NEB的T4连接酶。也试过formentas的。都不行。很郁闷，所以想请问各路虫友们给支支招！ 本人不胜感激！ |
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2楼2009-12-31 00:57:22
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10楼2010-01-01 11:10:00