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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教:关于克隆的问题
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fly9081

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教:关于克隆的问题

请教大家，在做亚克隆表达设计引物时，在引物两端加酶切位点，但如果此酶切位点与T载体（TA克隆）上的酶切位点有相同的，对之后的酶切会有影响吧？但怎么一般没考虑这点呢？
谢谢大家！
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1楼 2009-12-30 20:55:36
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dcb005

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
肯定会的
酶又不认识谁是谁的？
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★穷则独善其身,达则兼济天下★
2楼2009-12-30 21:22:18
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dcb005

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by fly9081 at 2009-12-30 20:55:
请教大家，在做亚克隆表达设计引物时，在引物两端加酶切位点，但如果此酶切位点与T载体（TA克隆）上的酶切位点有相同的，对之后的酶切会有影响吧？但怎么一般没考虑这点呢？
谢谢大家！

但都切开了，只要挖胶回收gene片段
应该就是你加上酶切位点的片段
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★穷则独善其身,达则兼济天下★
3楼2009-12-30 21:24:32
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fly9081

铁虫 (小有名气)
恩 谢谢大家帮助
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4楼2009-12-30 22:30:16
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最好不要这样做吧，最好用simple的T载体。
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5楼2009-12-30 22:59:56
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liuyanyy

新虫 (正式写手)
肯定要考虑这种情况，最好能切出的所有片段大小有明显的差别，这样电泳就能很容易收到目的条带，至于把T载体切碎都无所谓了。
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6楼2010-01-01 10:21:21
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