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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】急！如何获得no-DNA water？
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nlhnq55

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】急！如何获得no-DNA water？

现在用兼并性很高的16S引物筛细菌，发现用水代替模板PCR扩增，也会出现较亮的条带。那么可能酶、缓冲液、引物或者水存在污染DNA片段。
      那么首先应该保证水的纯度。实验室的水是超纯水，灭菌的，但仍然不能保证DNA片段完全去除，或断裂成小片段了啊
      另外，还有试剂可能也存在污染，现在用全式金的试剂。
      请教各位大侠，该怎么解决这个问题？
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无穷般若心自在，语默动静体自然
1楼 2009-12-29 10:58:12
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 12-29 12:05
如果水有DNA污染，那么用酶去干净或者照紫外cross-link一下就好了
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2楼2009-12-29 11:44:36
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wwyy0818

新虫 (小有名气)
★
1949stone(金币+1,VIP+0):可以 12-29 12:06
用紫外照
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3楼2009-12-29 12:02:11
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pal2004

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
双蒸水或者离子交换柱处理得到的去离子水里应该不会有DNA分子，lz应该首先考虑盛水容器是否污染！
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4楼2009-12-29 12:07:48
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qwop654

禁言 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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5楼2009-12-29 15:46:07
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nlhnq55

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-12-29 11:44:
如果水有DNA污染，那么用酶去干净或者照紫外cross-link一下就好了

可以考虑用DNA酶降解，但最后残留的酶又怎么去除呢？
紫外照射后见光不是很容易修复的吗
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无穷般若心自在，语默动静体自然
6楼2009-12-30 09:06:27
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nlhnq55

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by pal2004 at 2009-12-29 12:07:
双蒸水或者离子交换柱处理得到的去离子水里应该不会有DNA分子，lz应该首先考虑盛水容器是否污染！

我查过了，这两种操作包括超纯水也只能在一定程度上去除杂质等
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无穷般若心自在，语默动静体自然
7楼2009-12-30 09:08:11
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nlhnq55

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by qwop654 at 2009-12-29 15:46:
估计也不是水的问题，我师妹做实验也出现过这种问题。

最近发现有公司直接出售DNA free water， 打算买了试试
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无穷般若心自在，语默动静体自然
8楼2009-12-30 09:09:16
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by nlhnq55 at 2009/12/30, 09:06:

可以考虑用DNA酶降解，但最后残留的酶又怎么去除呢？
紫外照射后见光不是很容易修复的吗

残留的酶高温灭菌就可以变性失活掉
光修复那是要相关酶系参与的……
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9楼2009-12-30 09:40:28
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nlhnq55

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by nlhnq55 at 2009-12-30 09:09:

最近发现有公司直接出售DNA free water， 打算买了试试

嗯，这倒是。
可是加酶就要加buffer,这样岂不是会影响后续的PCR体系的离子等浓度？
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无穷般若心自在，语默动静体自然
10楼2009-12-31 14:18:16
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