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qianggene

铜虫 (小有名气)

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专业: 食品科学基础

[交流] 【求助/交流】求助5‘race PCR 产物测序问题

给位虫友，大家好！我想请教一个问题，最近一直困惑我，我在克隆基因，只差5’没有得到，其中编码区大约是500多bp,UTR不知有多少，我用的是宝生物的5‘-full-race试剂盒，设计了几个引物，测了很多次序，可结果总是不对，而且，常常是上下游引物都拿到，但依然不是我要的基因，把测序结果翻译过来的aa在NCBI 上blast,结果总是说这是个conserved hypothetical protein 。请高手给我一些建议，帮我解释一下这到底是怎么回事，谢谢啦！

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1楼 2009-12-28 14:41:30

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qianggene

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引用回帖:

Originally posted by yujiaping1 at 2009-12-28 15:52:
上下游引物都对了，怎么可能不是你要的基因呢，真奇怪，难道你设计的引物和那个conserved hypothetical protein的序列有相同的地方？而且多对引物都显示你要的基因就是它，那么一定不会错啊

但真的就不是我想要的基因啊，除了引物那块相同，其他都不一样，郁闷啊~