24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 686  |  回复: 9
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

qianggene

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助5‘race PCR 产物测序问题

给位虫友,大家好!我想请教一个问题,最近一直困惑我,我在克隆基因,只差5’没有得到,其中编码区大约是500多bp,UTR不知有多少,我用的是宝生物的5‘-full-race试剂盒,设计了几个引物,测了很多次序,可结果总是不对,而且,常常是上下游引物都拿到,但依然不是我要的基因,把测序结果翻译过来的aa在NCBI 上blast,结果总是说这是个conserved hypothetical protein 。请高手给我一些建议,帮我解释一下这到底是怎么回事,谢谢啦!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangym1123

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by qianggene at 2009-12-28 14:41:
给位虫友,大家好!我想请教一个问题,最近一直困惑我,我在克隆基因,只差5’没有得到,其中编码区大约是500多bp,UTR不知有多少,我用的是宝生物的5‘-full-race试剂盒,设计了几个引物,测了很多次序,可结果总 ...

这种情况是正常的,我也碰到过,UTR本身就不保守,有可能很长,也可能很短。所以,做RACE是时PCR的延伸时间要长一点,可以两分钟,反转录之前保证RNA的完整性和纯度!
10楼2009-12-31 08:57:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qianggene 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见