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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 【求助】求助：液质问题！！
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悲伤情调

[交流] 【求助】求助：液质问题！！

我做的是生物制品中的氨苄西林残留，内标选的阿莫西林。
仪器：美国AB3200，液相是岛津LC-20AD。
流动相条件：乙腈，甲酸水（甲酸调PH3.1)
梯度程序：0.01min 乙腈5%
2min 乙腈5%
6min 乙腈80%
7min 乙腈5%
8min 乙腈5%
由于基质里面含有不挥发性盐，所以用了切换阀，前三分钟打进废液，后面再进质谱。
这个条件一直做的很好，内标在4min出峰，氨苄西林在5.4min出峰。现在的问题是：条件不能重复了，内标峰形很怪(峰分叉，很毛糙），而且出峰时间延迟了0.5min.而氨苄西林没有变化。如果轻微变一下梯度条件，内标峰就变的很好了，所以我认为质谱是没有问题的。现在的问题就出在液相条件上，我找了很多原因，最开始换了色谱柱，换了两根（同品牌，同规格），一根还是新的，但内标出峰还是一样怪！现在就排除了柱子的问题，那么问题是不是就出在流动相条件上？！乙腈用的牌子是默克的，应该没问题吧。水是制的超纯水，以前也一直这样用的，调PH前是校正了PH仪的，PH值应该还是没问题。但问题还是没有解决！是否是梯度程序问题呢？（但以前一直都是用的这个梯度，重复性很好啊）
请教高手，帮忙找下原因啊！这个问题困扰我好久了，方法学已经做完了，现在要测样品了，确出现了这种问题，小妹真的很急啊！

[ Last edited by 悲伤情调 on 2009-12-25 at 23:22 ]
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1楼 2009-12-25 23:12:48
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shooseal

木虫 (著名写手)
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opq691(金币+1,VIP+0):谢谢回帖交流 12-27 13:08
液质联用？？质谱我还没接触过诶，你所说的改变梯度条件是指什么？？
有没有可能是平衡时间不够啊？？
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Never give up，never shirk
2楼2009-12-26 00:51:47
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悲伤情调

标准品也是一样的，我也试过不接十通阀，直接进质谱，出峰还是一样的！
找了一个星期的原因了，还是不解！请求高手帮忙！
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3楼2009-12-26 09:17:12
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happy169

木虫 (著名写手)

冰王子蜜
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opq691(金币+3,VIP+0):辛苦了 12-26 22:00
引用回帖:
Originally posted by 悲伤情调 at 2009-12-25 23:12:
我做的是生物制品中的氨苄西林残留，内标选的阿莫西林。
仪器：美国AB3200，液相是岛津LC-20AD。
流动相条件：乙腈，甲酸水（甲酸调PH3.1)
梯度程序：0.01min 乙腈5%
2min 乙腈5%
6min 乙腈80%
7min 乙腈5% ...

我认为你的梯度陡度是不是太高了！！4min变化75%！！然后1min变回来！！
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我为新生
4楼2009-12-26 10:53:57
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happy169

木虫 (著名写手)

冰王子蜜
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引用回帖:
Originally posted by 悲伤情调 at 2009-12-25 23:12:
我做的是生物制品中的氨苄西林残留，内标选的阿莫西林。
仪器：美国AB3200，液相是岛津LC-20AD。
流动相条件：乙腈，甲酸水（甲酸调PH3.1)
梯度程序：0.01min 乙腈5%
2min 乙腈5%
6min 乙腈80%
7min 乙腈5% ...

你如果怀疑梯度出了问题可以做下试验啊！验证下！你这个问题好像很棘手！20AD是不是高压混合？会不会是在混合的时候产生了气泡呢。。。
另外就是考虑下你使用柱子的耐酸性如何？是不是适合你的这个方法！虽然换过新柱子，但是我认为还不能排除柱子的问题！
继续关注！！可以在专家版发下！
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我为新生
5楼2009-12-26 11:04:33
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悲伤情调

引用回帖:
Originally posted by happy169 at 2009-12-26 11:04:

你如果怀疑梯度出了问题可以做下试验啊！验证下！你这个问题好像很棘手！20AD是不是高压混合？会不会是在混合的时候产生了气泡呢。。。
另外就是考虑下你使用柱子的耐酸性如何？是不是适合你的这个方法！虽然换 ...

谢谢大虾的耐心解答！
以前的梯度条件0.01min、2min、6min、7min、8min
           B相%（甲酸水）      95               95         20         95        95
改变后       0.01min、1min、5min、6min、7min
           B相%      95               95         20         95        95

如果是梯度变化太陡的话，我使用改变后的梯度条件，内标峰形就很好了！这个应该怎么解释呢？梯度变化没有变，只是前面初始梯度的平衡时间变短了。
“20AD是不是高压混合？会不会是在混合的时候产生了气泡呢。。。”这个问题我也想到过，后来还打电话咨询了岛津的工程师，他说不可能这个原因，他说气泡只会影起压力的波动，在紫外检测器上有相应，比如出一个很大的气泡峰，但是在质谱上是没有影响的。
柱子的耐酸性是很好的，可以承受2——10的范围，我的PH是3.1.
期待您的回答！
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6楼2009-12-26 12:51:35
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happy169

木虫 (著名写手)

冰王子蜜
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引用回帖:
Originally posted by 悲伤情调 at 2009-12-26 12:51:


谢谢大虾的耐心解答！
以前的梯度条件0.01min、2min、6min、7min、8min
           B相%（甲酸水）      95               95         20         95        95
改变后       0.01min、1min、5min、6min、 ...

有点晕，你到底是觉得质谱有问题还是液相出了问题？你说的峰分叉是说的液相吧！但是你说梯度修改后峰型变好了，那就用这个梯度条件不可以吗?
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我为新生
7楼2009-12-26 16:13:39
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悲伤情调

引用回帖:
Originally posted by happy169 at 2009-12-26 16:13:

有点晕，你到底是觉得质谱有问题还是液相出了问题？你说的峰分叉是说的液相吧！但是你说梯度修改后峰型变好了，那就用这个梯度条件不可以吗?

不好意思，可能我的问题有点复杂！我做的是液质联用，最后检测到得色谱峰分叉。这个是突然出现的问题，以前用的梯度条件现在重复不出来了，但改变下梯度程序，内标峰就不分叉了。因为我已经用以前的梯度条件把方法验证做完了，如果现在要改梯度条件的话，我就得重新做方法验证吧，所以想把原因找到。
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8楼2009-12-26 20:07:24
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xpli

金虫 (小有名气)
是有点复杂
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9楼2009-12-26 22:06:19
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悲伤情调

引用回帖:
Originally posted by xpli at 2009-12-26 22:06:
是有点复杂

楼 上朋友能给详细说下吗？很急。。
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10楼2009-12-26 22:23:30
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