24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 612  |  回复: 9
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

chener

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助:好点的反转录酶

最近通过RACE 拿到一个基因的5’ 和 3’ 端,现在想克隆这个基因的全长cDNA,有2800多bp,用常规的M-MLV反转录酶和dT18反转录总是不能扩增到全长,原因可能是反转录的时候没有延伸到5’ 端,所以想请教大家有没碰到过类似的问题,能不能推荐一个效率比较高的反转录酶。

[ Last edited by amisking on 2009-12-24 at 12:40 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chener

金虫 (小有名气)

我是先拿到这个基因的一段中间序列,再通过RACE分别拿到这个基因的5’ 和3’ 部分,包括UTR,RACE是用Kit做的。现在我想拿到这个基因的全长cDNA,用常规的M-MLV和dT18反转录,再在5’ UTR和3’ UTR区设计引物扩增,总是扩增不到完整的片段。所以怀疑是反转录酶不够好。因为我用了好几对引物扩都不行。
5楼2009-12-24 13:38:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

amilie030312

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 12-24 12:40
chener(金币+2,VIP+0): 12-24 16:09
我原来用Stratagene公司有一个高保真的反转录酶,长度肯定没问题的,我记得看过好像是反转录20K都可以。
2楼2009-12-24 12:37:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 12-24 13:06
chener(金币+2,VIP+0): 12-24 16:09
2.8K也不算很长啊,何况你RACE是分5’和3‘两方面进行的,你是用哪种RACE,即使是RACE,各家公司也是不尽相同的,你RNA的质量如何,
我做RACE用的就是MMLV(CLONTECH),
3楼2009-12-24 12:47:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主


chener(金币+1,VIP+0): 12-24 16:09
好像前一段时间也有人联系我要公司信息!
如果没有人帮助你,那么你就去帮助别人。
4楼2009-12-24 13:07:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿西南大学生物学学硕344 求生物学相关调剂/生物与医药 +8 超人不会飞@ 2026-04-08 8/400 2026-04-14 16:06 by zs92450
[考研] 297,工科调剂?河南农业大学本科 +9 河南农业大学-能 2026-04-14 9/450 2026-04-14 16:03 by Art1977
[考研] 一志愿沪9,326求生物学调剂 +10 刘墨墨 2026-04-13 10/500 2026-04-14 15:16 by zs92450
[考研] 本科211,报考085601-310分 +16 ararak 2026-04-13 16/800 2026-04-14 14:55 by Delta2012
[基金申请] RY:中国产出的科学垃圾论文,绝对数量和比例都世界第一 +6 zju2000 2026-04-14 17/850 2026-04-14 14:34 by jurkat.1640
[考研] 一志愿双非085400电子信息344 求调剂,对材料和化学方向也感兴趣 +12 无情的小羊 2026-04-09 13/650 2026-04-13 14:17 by 张zhihao
[考研] 材料考研调剂 +29 云木达达 2026-04-11 31/1550 2026-04-13 13:32 by lyh鲁老师
[考研] 346分,工科0854求调剂,专硕 +6 moser233 2026-04-12 7/350 2026-04-12 22:11 by fqwang
[考研] 材料与化工300求调剂 +39 肖开文 2026-04-09 43/2150 2026-04-12 01:30 by 秋豆菜芽
[考研] 一志愿厦大0856,306求调剂 +15 Bblinging 2026-04-11 15/750 2026-04-11 22:53 by 314126402
[考研] 材料工程日语考生求调剂 +7 0856?调剂 2026-04-10 7/350 2026-04-11 21:33 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂 +3 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 14:13 by luhong1990
[考研] 农学0904 312求调剂 +6 Say Never 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:33 by wwj2530616
[考研] 考研调剂 +26 硕星赴 2026-04-09 27/1350 2026-04-10 22:24 by 猪会飞
[考研] 计算机类求调剂,22408-274分 +7 上岸de小虫 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:56 by fxue1114
[考研] 一志愿矿大,材料工程专硕314分,0856可调都可以 +15 无懈可击的巨人 2026-04-09 15/750 2026-04-10 18:10 by hmn_wj
[考研] 本9 一志愿西工大085601 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-10 16:57 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 材料与工程 324分 专硕 +19 翩翩一书生 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 11:41 by wp06
[考研] 292求调剂 +9 笑笑袁 2026-04-09 9/450 2026-04-10 10:05 by LHGeng
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
信息提示
请填处理意见