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xyls6868

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】aflp

请教各位大侠，aflp的选择性扩增，琼脂糖凝胶电泳检测应该是什么样的结果呢？不会是应该充满整个甬道吧，谢谢
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1楼 2009-12-23 16:47:17
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695

木虫 (职业作家)
★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0): 12-23 18:57
不会的，可能会出几条带，有的甚至就没带，呵呵，不要想着会充满整个泳道
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2楼2009-12-23 18:01:13
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xyls6868

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 695 at 2009-12-23 18:01:
不会的，可能会出几条带，有的甚至就没带，呵呵，不要想着会充满整个泳道

我做的是植物DNA，那么选扩的结果应该和预扩差不多吧，应该是数量少些，没有明显的差别吧？
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3楼2009-12-23 19:27:23
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
选扩的结果应该是可以看见密集的条带，集中在1000以下，和预扩不一样啊
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4楼2009-12-23 20:54:19
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xyls6868

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2009-12-23 20:54:
选扩的结果应该是可以看见密集的条带，集中在1000以下，和预扩不一样啊

多谢指点，我已经开始有点体会了。非常感谢
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5楼2009-12-23 21:49:14
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stelyo

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个也要根据你选扩的引物加了几个选择性碱基。加得越多，条带越少，越趋于没有条带或有几个条带（在丙烯酰胺胶上就不是这样了）。加的越少，越趋于弥散，也有可能整体是弥散，但在某个区域有有主带。
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6楼2009-12-23 22:53:04
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xyls6868

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by stelyo at 2009-12-23 22:53:
这个也要根据你选扩的引物加了几个选择性碱基。加得越多，条带越少，越趋于没有条带或有几个条带（在丙烯酰胺胶上就不是这样了）。加的越少，越趋于弥散，也有可能整体是弥散，但在某个区域有有主带。

谢谢，我懂了。
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7楼2009-12-24 13:24:08
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xyls6868

新虫 (小有名气)

aflp

还想请教一下各位大虾，关于琼脂糖凝胶电泳检测酶切连接和pcr结果的时候，检测结果完全准确吗？为什么我的结果是酶切检测可以的样品pcr检测结果不好。而酶切检测不好的样品pcr却出现了结果 呢？
这种情况是说明我的检测有问题呢？还是琼脂糖凝胶电泳并不能完全代表aflp各过程产物呢？
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8楼2009-12-25 13:29:53
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你认为什么样的酶切结果算好呢，能看一下你的图片吗？我后来做的时候都不检测酶切连接，预扩也不检测，直接看选扩，但是选扩结果好的，检测前面几步也基本比较稳定。不过AFLP实验现在更多的问题是，选扩结果不稳定，重复性不好，个体差异大。最近发现很多人用AFLP建图谱的时候，第一个连锁群的巨大无比，这是由于AFLP做得不好，很多个体该有的带总是不出造成的，这个问题太致命了
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9楼2009-12-25 14:02:35
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xyls6868

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2009-12-25 14:02:
你认为什么样的酶切结果算好呢，能看一下你的图片吗？我后来做的时候都不检测酶切连接，预扩也不检测，直接看选扩，但是选扩结果好的，检测前面几步也基本比较稳定。不过AFLP实验现在更多的问题是，选扩结果不稳定 ...

我觉得正确的酶切结果单酶切的结果是充满整个甬道的弥散，双酶切的结果弥散应该是在甬道的下半部分。你认为呢？
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10楼2009-12-25 15:08:51
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