应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pcr体系和产物浓度
61/1返回列表
查看: 559  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

ch2009121

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】pcr体系和产物浓度

下面是我设计的pcr体系如下：
水：9.8  ul
B： 2.8  ul
Mg2+ ：3.0  ul
dNTP：2.0  ul
引物： 2.2+2.2  ul
DNA： 2.5  ul
酶：   0.5   ul
DNA 是植物的   扩增片段为600bp左右
DNA的浓度分别做了稀释：10倍，20倍，30倍，40倍，50倍，100倍。
引物为特异性引物
循环参数：  94℃  3min
                 94℃  30s   50℃  45s   72℃  10 min  （40个循环）
                72℃  10min
而且pcr产物的浓度较低

请大家帮我看看设计的是否有问题，是什么原因导致产物的浓度低呢，谢谢大家！！！！！！

[ Last edited by ch2009121 on 2009-12-21 at 14:02 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-12-21 10:44:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stelyo

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 12-21 19:10
扩增较弱的原因有很多啊。首先，你都没有说你的扩增片段多大，什么的DNA。如果扩增片段不是超大，用不着再循环中延伸10min吧？！dNTP,引物等浓度也不知道。一般来说退火温度过高，引物设计不合理，试剂浓度不合适，模板浓度过低等都会造成产物浓度低。还有一个容易忽视的问题，看看合成公司有没有把引物合错。我们这就出现过这种情况，再合成就扩增特好了。
赞一下(21人) 回复此楼
2楼2009-12-21 11:31:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hywang131

新虫 (初入文坛)
DNA浓度稀释的过低。
赞一下 回复此楼
3楼2009-12-21 13:58:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jianglimin

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的退火温度有没有问题，做个touch down试试
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-12-21 14:00:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 12-21 19:10
amisking(金币+5,VIP+0):鼓励新虫发帖！ 12-21 19:10
首先降低一下退火温度，如果不好，调整一下模版浓度，高低都可能有问题，实在不行，建议如楼上所说，做个降落PCR。但是以上建议是体系不存在问题的情况，你的体系没有交代清楚引物的浓度，引物浓度是扩增强弱的主要因素，酶的浓度也没有交代，照正常浓度你的酶用量好像太大了，有的时候酶中的甘油会抑制PCR反应
赞一下(41人) 回复此楼
5楼2009-12-21 16:58:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
循环中的72度延伸时间实在太长，1min足够
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2009-12-21 18:26:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ch2009121 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿新疆大学085401，314分 +4 咔咔咔咔9 2026-04-05 4/200 2026-04-12 02:21 by 秋豆菜芽
[考研] 280求调剂 +13 wzzz王 2026-04-09 13/650 2026-04-12 00:31 by 勇攀高峰0126
[考研] 一志愿211，0703化学305分求调剂 +26 严西西戏 2026-04-06 33/1650 2026-04-11 23:01 by 314126402
[考研] 0854调剂 +8 长弓傲 2026-04-11 9/450 2026-04-11 21:44 by 蓝云思雨
[考研] 293求调剂 +8 勇远库爱314 2026-04-06 8/400 2026-04-11 20:25 by 蓝云思雨
[考研] 283求调剂 086004考英二数二 +17 那个噜子 2026-04-10 18/900 2026-04-11 16:27 by 明月此时有
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +16 叶zilin 2026-04-10 16/800 2026-04-11 11:04 by may_新宇
[考研] 298求调剂 +5 残荷新柳 2026-04-07 5/250 2026-04-11 11:02 by 紫曦紫棋
[考研] 346，工科求调剂 +3 moser233 2026-04-09 3/150 2026-04-11 10:04 by zhq0425
[考研] 085402通信工程调剂，有4项学科竞赛国奖（电赛国二），硕士研究生调剂自荐信。 +5 m永o不v言o弃m 2026-04-09 5/250 2026-04-11 09:33 by zhq0425
[考研] 生物学308求调剂（一志愿华东师大） +6 相信必会光芒万� 2026-04-10 6/300 2026-04-11 05:23 by zhuwenxu
[考研] 一志愿华中农微生物，288分，三年实验经历 +10 代fish 2026-04-09 10/500 2026-04-10 09:49 by potato妹
[考研] 一志愿厦大生物学332求调剂 +10 池池池池池池 2026-04-08 10/500 2026-04-09 17:10 by 独醉梦孤城
[考研] 复试调剂，一志愿郑州大学材料与化工289分 +31 硕星赴 2026-04-08 31/1550 2026-04-09 16:54 by Delta2012
[考研] 328求调剂 +17 lftmya 2026-04-07 18/900 2026-04-09 08:05 by 5268321
[考研] 22408 266求调剂 +11 masss11222 2026-04-07 14/700 2026-04-08 11:06 by yulian1987
[考研] 生物医药调剂｜SCI中科院三区一作+多项科研成果 +8 likangxing 2026-04-07 11/550 2026-04-08 00:02 by lys0704
[考研] 材料工程专业日语生求调剂 +9 111623 2026-04-07 9/450 2026-04-07 23:31 by 一只好果子?
[考研] 材料调剂 +17 小刘同学吖吖 2026-04-06 18/900 2026-04-07 11:41 by 诗与自由
[考研] 求调剂 +7 张.1 2026-04-05 7/350 2026-04-05 20:40 by 啵啵啵0119
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭