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ch2009121

铁虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】pcr体系和产物浓度

下面是我设计的pcr体系如下：
水：9.8  ul
B： 2.8  ul
Mg2+ ：3.0  ul
dNTP：2.0  ul
引物： 2.2+2.2  ul
DNA： 2.5  ul
酶： 0.5 ul
DNA 是植物的扩增片段为600bp左右
DNA的浓度分别做了稀释：10倍，20倍，30倍，40倍，50倍，100倍。
引物为特异性引物
循环参数：  94℃  3min
               94℃  30s 50℃  45s 72℃  10 min  （40个循环）
            72℃  10min
而且pcr产物的浓度较低

请大家帮我看看设计的是否有问题，是什么原因导致产物的浓度低呢，谢谢大家！！！！！！

[ Last edited by ch2009121 on 2009-12-21 at 14:02 ]

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1楼 2009-12-21 10:44:43

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stelyo

新虫 (初入文坛)

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★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3,VIP+0): 12-21 19:10

扩增较弱的原因有很多啊。首先，你都没有说你的扩增片段多大，什么的DNA。如果扩增片段不是超大，用不着再循环中延伸10min吧？！dNTP,引物等浓度也不知道。一般来说退火温度过高，引物设计不合理，试剂浓度不合适，模板浓度过低等都会造成产物浓度低。还有一个容易忽视的问题，看看合成公司有没有把引物合错。我们这就出现过这种情况，再合成就扩增特好了。