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安静的位置i金虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】急！关于孢子萌发。
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我的课题是与真菌相关，目前在培养一种被孢霉，前段时间，冲孢子后涂布ＰＤＡ平板，28度静置培养，萌发率大约为百分之一，孢子液稀释两个梯度后，一块板大约可以长出几百个菌落，从一个月前开始，在操作和培养条件都没有变的情况下，孢子突然不萌发了，涂过板子后一个都不会长或是偶尔长一两个菌落，这次将原始菌种活化，冲了孢子后涂板，还是不萌发。 目前课题因为这个原因处在停滞阶段，非常着急，了解真菌的兄弟姐妹们，快给我些建议吧，万分感谢！！！ |
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克隆大虾
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5楼2009-12-20 20:00:39
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安静的位置i(金币+8,VIP+0): 12-31 14:22
安静的位置i(金币+8,VIP+0): 12-31 14:22
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你的这个霉菌我没做过，但是做过很多其它的真菌，从我的角度来问你几个问题： 1、我的课题是与真菌相关，目前在培养一种被孢霉，前段时间，冲孢子后涂布ＰＤＡ平板，28度静置培养，萌发率大约为百分之一 萌发率怎么计算？是首先在显微镜下数孢子浓度后涂板，实际生长菌落除以总孢子数吗？孢子液有没有过滤除去菌丝？菌丝也能萌发生长成菌落的。 2、孢子液稀释两个梯度后 稀释多少倍为一个稀释梯度？ 3、一块板大约可以长出几百个菌落 真菌菌落长得较大才能看得出一些菌落形态，这个菌落数太大了，菌落还没生长成可鉴别的形态，怎么知道长的就是你的菌？不能排除被污染的情况。我的很多真菌在生长初期都是白色的菌丝，一块直径9厘米的平板上如果要求是独立菌落以排除太密长成菌苔造成不能鉴别是多少个菌落合并而成的话，最多只能长50个！你的平板很大？ 4、从一个月前开始，在操作和培养条件都没有变的情况下，孢子突然不萌发了，涂过板子后一个都不会长或是偶尔长一两个菌落 孢子液没有保存好的话一样会死掉，时间越久死得越多。 5、这次将原始菌种活化，冲了孢子后涂板 如果是生长时间不够，孢子长得不多，冲也冲不下去多少。我是直接用牙签刮到水里，震荡后过滤。 |
2楼2009-12-20 01:32:13
3楼2009-12-20 08:51:42
安静的位置i
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你好！很高兴能碰到对真菌这么了解的高人。 1.萌发率就是想你所说，先是镜检计数，然后再根据涂布后的菌落数计数计算。我的孢子液是这样得到的，首先是用斜面管 培养至少两周时间，然后用0.03%吐温水溶液冲孢子，之后过滤布和20微米的滤膜，去除菌丝及其他杂质，然后离心12000rpm,10min,去除上清，用0.03%吐温水溶液清洗孢子，重复以上两个步骤两次，之后就是稀释涂板。 2. 一个稀释梯度就是稀释十倍。 3. 板子上最多长过约200个菌落，我一般不会等到它长成圆形白色较大菌落时再计数，因为那时菌落就都已经连成片了，我一般在有“菌斑”形成时计数，不知你的菌是否也是这样，就是萌发的最初阶段，它会形成半透明状态的圆形边缘不光滑的“菌斑”，直径在1-10mm，这是在对着灯光看时，是可以看清楚的， 4. 孢子液都是现用现涂板，没有将其置于冰箱中存放。 5.所有冲 孢子的斜面管都是在培养了至少两周后使用的。您是培养在平板上然后用牙签刮取的吧？不过我冲孢子后没有振荡这一步，只是用移液器洗吹，不过这步应该不是孢子不萌发的关键吧。 非常感谢你对我问题的解答，希望能为我提供些好的建议！非常感谢！也可站内信联系：） |
4楼2009-12-20 15:58:17
