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安静的位置i金虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】急！关于孢子萌发。
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我的课题是与真菌相关，目前在培养一种被孢霉，前段时间，冲孢子后涂布ＰＤＡ平板，28度静置培养，萌发率大约为百分之一，孢子液稀释两个梯度后，一块板大约可以长出几百个菌落，从一个月前开始，在操作和培养条件都没有变的情况下，孢子突然不萌发了，涂过板子后一个都不会长或是偶尔长一两个菌落，这次将原始菌种活化，冲了孢子后涂板，还是不萌发。 目前课题因为这个原因处在停滞阶段，非常着急，了解真菌的兄弟姐妹们，快给我些建议吧，万分感谢！！！ |
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安静的位置i
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你好！很高兴能碰到对真菌这么了解的高人。 1.萌发率就是想你所说，先是镜检计数，然后再根据涂布后的菌落数计数计算。我的孢子液是这样得到的，首先是用斜面管 培养至少两周时间，然后用0.03%吐温水溶液冲孢子，之后过滤布和20微米的滤膜，去除菌丝及其他杂质，然后离心12000rpm,10min,去除上清，用0.03%吐温水溶液清洗孢子，重复以上两个步骤两次，之后就是稀释涂板。 2. 一个稀释梯度就是稀释十倍。 3. 板子上最多长过约200个菌落，我一般不会等到它长成圆形白色较大菌落时再计数，因为那时菌落就都已经连成片了，我一般在有“菌斑”形成时计数，不知你的菌是否也是这样，就是萌发的最初阶段，它会形成半透明状态的圆形边缘不光滑的“菌斑”，直径在1-10mm，这是在对着灯光看时，是可以看清楚的， 4. 孢子液都是现用现涂板，没有将其置于冰箱中存放。 5.所有冲 孢子的斜面管都是在培养了至少两周后使用的。您是培养在平板上然后用牙签刮取的吧？不过我冲孢子后没有振荡这一步，只是用移液器洗吹，不过这步应该不是孢子不萌发的关键吧。 非常感谢你对我问题的解答，希望能为我提供些好的建议！非常感谢！也可站内信联系：） |
4楼2009-12-20 15:58:17
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6楼2009-12-20 23:28:59
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7楼2009-12-20 23:31:52
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12楼2009-12-21 22:01:27
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13楼2009-12-22 09:46:20
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14楼2009-12-22 09:57:42
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15楼2009-12-22 10:01:37