应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】8kb的片段连接之后却变成了6kb左右！
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 665  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xiangyuan7816

[交流] 【求助/交流】8kb的片段连接之后却变成了6kb左右！

片段太大，几次都没连上载体，最后用一种无奈的方法，将片段连到pmd18-t上，这个载体大小为2692kb，一般连5kb之下的片段比较容易成功，这次连接之后，竟然长出了一个菌斑，挑取之后用这个基因的两端酶切之后应该是8.3kb的片段，但跑胶之后发现片段却是6kb左右，本来有图片，但不知道怎么上传，请高手指教！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-12-16 12:31:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangyuan7816

引用回帖:
Originally posted by apple-z at 2009-12-16 22:54:
不知道你连接的片段是酶切的产物还是PCR的产物，如果是PCR产物有没有PCR后跑胶鉴定，如果没有的话，就有可能是PCR除了问题。比如由于你片段自身的原因，很容易与引物发生非特异性结合，造成部分碱基的丢失。

我连接的片段是PCR产物，因为是连接到T载体上，所以可以直接连。本来之前的打算是片段太大，直接连到表达载体上，但没有成功，所以又回过头来按照一般的构建方法，先连T载体，再连表达载体。我PCR产物跑胶确定是8Kb左右，这个酶切之后却变成了6kb左右，确实想不明白是怎么回事，今天我用质粒进行了PCR扩那个8Kb的片段。
赞一下 回复此楼
10楼2009-12-17 14:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

xiangyuan7816

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎上图！ 12-17 08:37
用的Marker的带依次为：23130bp、9416bp、6557bp、4361bp、2322bp、2027bp、564bp
赞一下(20人) 回复此楼
2楼2009-12-16 12:36:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 12-17 08:37
曾经我连接一段2KB的DNA转化大肠杆菌，结果出来好几种连接情况的，比正确片段大的小的都有。如果连接的是完整的一个酶基因就可以用活性筛选出来，但我连接的是基因的片段，最后只能挑选了一种连接正确的去测序，序列比对结果跟预想中一致。至于为什么，我也不知道。
赞一下(21人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2009-12-16 13:04:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
曾经试过连接基因的，单酶切口，结果有的载体连接上两个拷贝基因，就比原来预想中的大了两倍，估计也是连接得很乱的，但是有活性就好筛选了。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2009-12-16 13:07:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 335求调剂 +19 想上岸呀！！ 2026-04-12 21/1050 2026-04-14 16:23 by Art1977
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +25 ioodiiij 2026-04-08 25/1250 2026-04-14 15:59 by zs92450
[考研] 296求调剂 +8 汪！？！ 2026-04-09 9/450 2026-04-14 15:15 by 逆水乘风
[考研] 本科西工大 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-13 23:08 by pies112
[基金申请] 2026 WR青拔 +3 冬日阳光CAS 2026-04-09 6/300 2026-04-13 18:40 by liuchb715
[考研] 346分，工科0854求调剂，专硕 +6 moser233 2026-04-12 7/350 2026-04-12 22:11 by fqwang
[考研] 电气工程专硕320求调剂 +5 小麻子111 2026-04-10 5/250 2026-04-12 10:47 by zhouyuwinner
[考研] 材料与化工300求调剂 +39 肖开文 2026-04-09 43/2150 2026-04-12 01:30 by 秋豆菜芽
[考研] 22408调剂315分 +3 zhuangyan123 2026-04-09 3/150 2026-04-12 00:25 by 蓝云思雨
[考研] 药学专硕调剂 +8 ? 一路生?花? 2026-04-10 10/500 2026-04-11 21:21 by zhouxiaoyu
[考研] 284求调剂 +11 archer.. 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:23 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +5 文道星台 2026-04-11 5/250 2026-04-11 15:01 by 凯凯要变帅
[考研] 0859，337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 11:34 by caotw2020
[考研] 调剂 +4 电气300求调剂不 2026-04-08 7/350 2026-04-11 10:44 by 紫曦紫棋
[考研] 22408调剂求助 +7 毂12 2026-04-09 9/450 2026-04-11 09:23 by 哦哦123
[考研] 材料与化工调剂 +12 否极泰来2026 2026-04-10 13/650 2026-04-11 00:28 by wangjihu
[考研] 调剂 化学 307 +21 73372112 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 23:53 by wj165256
[考研] 调剂 +12 卷卷卷心菜_ 2026-04-09 13/650 2026-04-10 22:36 by Ftglcn90
[考研] 一志愿中南大学物理学，英一66，求调剂 +4 长烟旖旎 2026-04-08 5/250 2026-04-10 10:31 by 颖果儿
[考研] 调剂申请086000一志愿西北农林科技大学生物与医药320分-本科齐鲁工业大学 +3 美美女士 2026-04-09 3/150 2026-04-10 10:31 by liuhuiying09
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭