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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于定量（real-time）PCR的标准曲线制作
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小小木虫8580

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于定量（real-time）PCR的标准曲线制作

本人想做某一个基因的在某一环境条件下的mRNA的绝对拷贝数。
目前还不清楚这个标准曲线该如何去做。
自己的思路是把该标准基因转到质粒中，然后摇菌，抽质粒，分光光度法测定质粒DNA浓度，根际质粒DNA的分子量换算成摩尔数，然后再梯度稀释后，做荧光定量PCR的标准曲线。自己觉得可行，但是感觉好麻烦。
不知道有没有更加简便的方法。查文献的话一般不会给出标准曲线的做法，可能太简单了吧。有没有人能给个好的意见，谢谢！
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1楼 2009-12-16 11:48:27
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小小木虫8580

金虫 (小有名气)
没有人知道吗？？？
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2楼2009-12-16 14:04:35
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叔扬

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能大家还没有理解你的意思。
你提问怎样做标准曲线，下面你又回答了用“荧光定量PCR”做标准曲线。标准曲线难道不是用荧光定量PCR仪自动完成的吗？
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小子无识
3楼2010-01-07 10:55:13
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
以质粒为模板的是最稳定的，就是用你说的方法做
当然了，还有买标准品，但其实并不需要
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-01-07 12:46:12
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