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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】定量PCR
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leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate

[交流] 【求助/交流】定量PCR

第一次做定量，就是试试用已知浓度的样品的做条标准曲线。把原始浓度的做了5个梯度稀释，但是没有平行样，所以加上空白对照一共7个样。用SYBR法，可惜忘了做熔解（即DISSOCIATION PROTOCOL）。。。所以最后的图中没有熔解曲线。但是连标准曲线都没有，为什么？我当时把前6个样都设成STANDARD了呀。求高人指导！急！多谢！
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不忘初心，为梦远行。
1楼 2009-12-15 17:23:18
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fuhui1108

木虫 (正式写手)

小害虫
啊顶,专家来指导啊!!
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小害虫
2楼2009-12-17 18:01:20
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小虫之老虫

新虫 (小有名气)
也想了解
帮顶
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3楼2009-12-17 22:41:17
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leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate
引用回帖:
Originally posted by fuhui1108 at 2009-12-17 18:01:
啊顶,专家来指导啊!!

我知道怎么做了，在开始PCR之前的一步，即决定样品是unknown,standard,NTC的那步，在选项栏里有一个quantity的选项，选定标准样品编号后，可以在里面输入DNA样品的数量或浓度，然后把所有标准样品的这个选项都写好，再进入下一步PCR步骤，当结束后，就可以看到标准曲线了
PS：如果是SYBR法，千万别忘了在PCR步骤后添加association protocol，或者在开始时选dissociation而不是absolute，否则没有溶解曲线就白搭了哦
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不忘初心，为梦远行。
4楼2009-12-18 08:53:57
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leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate
引用回帖:
Originally posted by 小虫之老虫 at 2009-12-17 22:41:
也想了解
帮顶

我知道怎么做了，在开始PCR之前的一步，即决定样品是unknown,standard,NTC的那步，在选项栏里有一个quantity的选项，选定标准样品编号后，可以在里面输入DNA样品的数量或浓度，然后把所有标准样品的这个选项都写好，再进入下一步PCR步骤，当结束后，就可以看到标准曲线了
PS：如果是SYBR法，千万别忘了在PCR步骤后添加association protocol，或者在开始时选dissociation而不是absolute，否则没有溶解曲线就白搭了哦
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不忘初心，为梦远行。
5楼2009-12-18 08:54:23
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leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate
我用的仪器是ABI公司的7500，不知楼上二位的仪器是什么，希望能有所帮助。
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不忘初心，为梦远行。
6楼2009-12-18 08:56:17
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boouy

银虫 (正式写手)
需要输入模板量参数。
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7楼2009-12-18 12:01:41
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沙中清泉

木虫 (正式写手)
学习了，谢谢
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8楼2009-12-18 12:46:11
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