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leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate

[交流] 【求助/交流】定量PCR

第一次做定量,就是试试用已知浓度的样品的做条标准曲线。把原始浓度的做了5个梯度稀释,但是没有平行样,所以加上空白对照一共7个样。用SYBR法,可惜忘了做熔解(即DISSOCIATION PROTOCOL)。。。所以最后的图中没有熔解曲线。但是连标准曲线都没有,为什么?我当时把前6个样都设成STANDARD了呀。求高人指导!急!多谢!
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不忘初心,为梦远行。
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leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate

引用回帖:
Originally posted by 小虫之老虫 at 2009-12-17 22:41:
也想了解
帮顶

我知道怎么做了,在开始PCR之前的一步,即决定样品是unknown,standard,NTC的那步,在选项栏里有一个quantity的选项,选定标准样品编号后,可以在里面输入DNA样品的数量或浓度,然后把所有标准样品的这个选项都写好,再进入下一步PCR步骤,当结束后,就可以看到标准曲线了
PS:如果是SYBR法,千万别忘了在PCR步骤后添加association protocol,或者在开始时选dissociation而不是absolute,否则没有溶解曲线就白搭了哦
不忘初心,为梦远行。
5楼2009-12-18 08:54:23
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fuhui1108

木虫 (正式写手)

小害虫

啊顶,专家来指导啊!!
小害虫
2楼2009-12-17 18:01:20
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leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate

引用回帖:
Originally posted by fuhui1108 at 2009-12-17 18:01:
啊顶,专家来指导啊!!

我知道怎么做了,在开始PCR之前的一步,即决定样品是unknown,standard,NTC的那步,在选项栏里有一个quantity的选项,选定标准样品编号后,可以在里面输入DNA样品的数量或浓度,然后把所有标准样品的这个选项都写好,再进入下一步PCR步骤,当结束后,就可以看到标准曲线了
PS:如果是SYBR法,千万别忘了在PCR步骤后添加association protocol,或者在开始时选dissociation而不是absolute,否则没有溶解曲线就白搭了哦
不忘初心,为梦远行。
4楼2009-12-18 08:53:57
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leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate

我用的仪器是ABI公司的7500,不知楼上二位的仪器是什么,希望能有所帮助。
不忘初心,为梦远行。
6楼2009-12-18 08:56:17
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