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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白体外表达蛋白PAGE胶看不到
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zhoum1322

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】蛋白体外表达蛋白PAGE胶看不到

请教一下蛋白体外表达的问题。我用的是Promega公司的TNT® T7 Quick for PCR DNA 体外表达，引物设计的没有问题。
但是为什么跑PAGE胶看不到目的带？

是蛋白的表达量太少还是其他的原因.

另外蛋白体系中红红 的东西。很影响表达蛋白的 检测，如何去除啊
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1楼 2009-12-14 15:49:39
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忘记将来

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没有东东呀，是不是反应体系有问题，或者试剂放得太久了，
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4楼2009-12-14 16:43:04
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tianpingpe

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢 12-14 16:44
最好发个图看看，你的marker正常吗？条带和亮度等都正常吗，你电泳的是全细胞还是破碎的上清？你能确定你的蛋白表达了吗？
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2楼2009-12-14 15:54:47
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zhoum1322

新虫 (初入文坛)
★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0):欢迎发图 12-14 16:45
引用回帖:
Originally posted by tianpingpe at 2009-12-14 15:54:
最好发个图看看，你的marker正常吗？条带和亮度等都正常吗，你电泳的是全细胞还是破碎的上清？你能确定你的蛋白表达了吗？

我采用的是Promega公司的TNT® T7 Quick for PCR DNA 无细胞表达系统。

一团红红的试剂，把PCR出的模板扔进去就可以出蛋白的那种。
左边的是加了PCR模板的，右边的是没有加PCR模板的对照

[ Last edited by zhoum1322 on 2009-12-14 at 16:01 ]
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3楼2009-12-14 16:00:23
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先考虑一下你的胶：Arc与Bis的比例，因为浓缩效应对分离影响很大。
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倚楼听风雨，淡看江湖路！
5楼2009-12-14 17:00:42
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