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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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zhoum1322

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】蛋白体外表达蛋白PAGE胶看不到

请教一下蛋白体外表达的问题。我用的是Promega公司的TNT® T7 Quick for PCR DNA 体外表达,引物设计的没有问题。
但是为什么跑PAGE胶看不到目的带?

是蛋白的表达量太少还是其他的原因.

另外蛋白体系中红红 的东西。很影响表达蛋白的 检测,如何去除啊
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tianpingpe

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
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1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢 12-14 16:44
最好发个图看看,你的marker正常吗?条带和亮度等都正常吗,你电泳的是全细胞还是破碎的上清?你能确定你的蛋白表达了吗?
2楼2009-12-14 15:54:47
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zhoum1322

新虫 (初入文坛)

★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0):欢迎发图 12-14 16:45
引用回帖:
Originally posted by tianpingpe at 2009-12-14 15:54:
最好发个图看看,你的marker正常吗?条带和亮度等都正常吗,你电泳的是全细胞还是破碎的上清?你能确定你的蛋白表达了吗?

我采用的是Promega公司的TNT® T7 Quick for PCR DNA 无细胞表达系统。

一团红红的试剂,把PCR出的模板扔进去就可以出蛋白的那种。
左边的是加了PCR模板的,右边的是没有加PCR模板的对照

[ Last edited by zhoum1322 on 2009-12-14 at 16:01 ]
3楼2009-12-14 16:00:23
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忘记将来

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没有东东呀,是不是反应体系有问题,或者试剂放得太久了,
4楼2009-12-14 16:43:04
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
首先考虑一下你的胶:Arc与Bis的比例,因为浓缩效应对分离影响很大。
倚楼听风雨,淡看江湖路!
5楼2009-12-14 17:00:42
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