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随游

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请大家帮忙:染菌(找到原因了,谢谢)


最近做实验总染菌,两次了,每次的量都很大,实在不知道怎么办了

下面是一些具体的做法,请大家帮忙看看,

碳源装在摇瓶中单独灭菌,氮源也单独灭菌,中间还有一种添加物,需要过滤灭菌,我用的是0.22um滤膜和直径50mm的滤器,过滤后再和碳氮源混合添加进去,之后再把菌丝体接进去......

PS:第一次的时候由于过滤,滤膜漏了所以染菌了,这次滤膜没有问题的,可还是染了,一百多瓶只有三十多没有染
实在不知道问题出在哪里了
(以上操作都是在工作台内进行的,都灭过菌,包括手也用酒精灭过的,哦,还有点疑问就是,如果过滤除菌哪有问题,为什么还有一部分没染菌呢?)
请大家帮帮我



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谢谢大家了,按照大家的建议我用排除法找到了染菌的原因,是过滤除菌出问题了

[ Last edited by 随游 on 2010-1-4 at 12:47 ]
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zier1011

木虫 (著名写手)


随游(金币+1,VIP+0):灭菌温度115,30min。碳氮源我都是提前一到两天配好的,好像没看到异常,不过不接菌丝的培养基倒是应该做一下,谢谢你的建议了 12-17 17:46
要是别人都不染菌,就你一个人染菌的话,就可以排除是通风处滤网的原因了。还是从操作方面找原因吧。
你灭菌温度和时间多少?芽孢不容易杀死的。
建议楼主把灭过菌的N、C源单独做一下培养,我是说不接种菌丝,就是C、N源,看看哪种污染的芽孢会不会生长,以排除灭菌不彻底的因素。
花还香香的
21楼2009-12-17 16:25:21
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hhaidong

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
随游(金币+2,VIP+0):好的,谢谢,我试试 12-13 12:21
随游(金币+2,VIP+0): 12-13 12:25
过程比较复杂!排除法,取每一步处理完的液体涂平板,观察是否染菌;估计最可能染菌的操作还是过滤。
2楼2009-12-13 12:11:18
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xingrl

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
随游(金币+2,VIP+0): 12-13 12:25
amisking(金币+1,VIP+0): 12-15 08:14
滤膜和滤器及盛装添加物的容器也严格灭菌了吧。
操作过程中手要消毒
3楼2009-12-13 12:22:17
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随游

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by xingrl at 2009-12-13 12:22:
滤膜和滤器及盛装添加物的容器也严格灭菌了吧。
操作过程中手要消毒

恩,都灭过菌了的
滤膜是放在滤器中灭的,用来装灭菌后溶液的空瓶子液灭过菌的
4楼2009-12-13 12:27:23
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