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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请大家帮忙：染菌（找到原因了，谢谢）
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随游

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请大家帮忙：染菌（找到原因了，谢谢）


最近做实验总染菌，两次了，每次的量都很大，实在不知道怎么办了

下面是一些具体的做法，请大家帮忙看看，

碳源装在摇瓶中单独灭菌，氮源也单独灭菌，中间还有一种添加物，需要过滤灭菌，我用的是0.22um滤膜和直径50mm的滤器，过滤后再和碳氮源混合添加进去，之后再把菌丝体接进去......

PS：第一次的时候由于过滤，滤膜漏了所以染菌了，这次滤膜没有问题的，可还是染了，一百多瓶只有三十多没有染
实在不知道问题出在哪里了
（以上操作都是在工作台内进行的，都灭过菌，包括手也用酒精灭过的,哦，还有点疑问就是，如果过滤除菌哪有问题，为什么还有一部分没染菌呢？）
请大家帮帮我



------------------------------------------------------------------------------------------------------
谢谢大家了，按照大家的建议我用排除法找到了染菌的原因，是过滤除菌出问题了

[ Last edited by 随游 on 2010-1-4 at 12:47 ]
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1楼 2009-12-13 11:33:55
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hhaidong

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
随游(金币+2,VIP+0):好的，谢谢，我试试 12-13 12:21
随游(金币+2,VIP+0): 12-13 12:25
过程比较复杂！排除法，取每一步处理完的液体涂平板，观察是否染菌；估计最可能染菌的操作还是过滤。
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2楼2009-12-13 12:11:18
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xingrl

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
随游(金币+2,VIP+0): 12-13 12:25
amisking(金币+1,VIP+0): 12-15 08:14
滤膜和滤器及盛装添加物的容器也严格灭菌了吧。
操作过程中手要消毒
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3楼2009-12-13 12:22:17
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随游

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xingrl at 2009-12-13 12:22:
滤膜和滤器及盛装添加物的容器也严格灭菌了吧。
操作过程中手要消毒

恩，都灭过菌了的
滤膜是放在滤器中灭的，用来装灭菌后溶液的空瓶子液灭过菌的
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4楼2009-12-13 12:27:23
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杨大妞

新虫 (小有名气)
★ ★
随游(金币+1,VIP+0):恩 是的哦 都是严格灭菌 超净工作台里进行的 12-13 13:49
amisking(金币+1,VIP+0): 12-15 08:14
这些操作要在通风橱里面操作的，在操作之前要打开紫外灭菌一会，再操作的，手也要灭菌
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5楼2009-12-13 13:40:20
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hjd_2358

木虫 (小有名气)
★ ★
随游(金币+1,VIP+0):用的是移液管...... 12-14 12:54
amisking(金币+1,VIP+0): 12-15 08:14
想问问你是用枪还是移液管呢？我曾经也出现过这种情况后来发现是由于枪的原因。移液管相对枪来说更可靠。
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6楼2009-12-14 08:59:55
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zhang6871

银虫 (正式写手)
★ ★
随游(金币+1,VIP+0):应该不是操作熟练程度吧，已经做了一段时间了，之前也没染过...... 12-14 12:56
amisking(金币+1,VIP+0): 12-15 08:14
想你这种情况的话，如果能够保证所有器具完好灭菌的话，那就应该是操作的问题。操作不熟练，等操作熟练以后就应该不会染菌了。
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过于功利，浮躁，布满灰尘的心都是创新的杀手!多记，心静，多动手，贴近大自然!
7楼2009-12-14 09:37:52
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陈思容

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★
随游(金币+1,VIP+0):碳源中的葡萄糖会和氮源反应的，如果一起高温灭菌的话 12-14 12:57
amisking(金币+2,VIP+0): 12-15 08:14
为什么C、N不放在一起灭呢，步骤多，灭菌的可能性就高
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8楼2009-12-14 10:44:04
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4021435281516

木虫 (小有名气)
★ ★
随游(金币+1,VIP+0):碳源还原性的糖会和氮源反应的...... 12-14 12:57
amisking(金币+1,VIP+0): 12-15 08:13
为什么不把C,N源和其他能放在一起的一起灭菌呢？
减少灭菌环节应该会大大减少染菌的几率！
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9楼2009-12-14 12:46:28
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flzt2009

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
随游(金币+2,VIP+0):我也怀疑菌种问题，但又有没染的；氮源就是酵母浸粉；过滤的时候压力一直有的 12-14 17:31
amisking(金币+1,VIP+0): 12-15 08:13
原因分析：菌种是否污染；N源中是否有黄豆饼粉等固形物未完全用水泡透，导致灭菌不彻底；无菌过滤器滤膜破损或在过滤时因压力太大破损；操作问题
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10楼2009-12-14 16:24:28
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