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随游

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请大家帮忙:染菌(找到原因了,谢谢)


最近做实验总染菌,两次了,每次的量都很大,实在不知道怎么办了

下面是一些具体的做法,请大家帮忙看看,

碳源装在摇瓶中单独灭菌,氮源也单独灭菌,中间还有一种添加物,需要过滤灭菌,我用的是0.22um滤膜和直径50mm的滤器,过滤后再和碳氮源混合添加进去,之后再把菌丝体接进去......

PS:第一次的时候由于过滤,滤膜漏了所以染菌了,这次滤膜没有问题的,可还是染了,一百多瓶只有三十多没有染
实在不知道问题出在哪里了
(以上操作都是在工作台内进行的,都灭过菌,包括手也用酒精灭过的,哦,还有点疑问就是,如果过滤除菌哪有问题,为什么还有一部分没染菌呢?)
请大家帮帮我



------------------------------------------------------------------------------------------------------
谢谢大家了,按照大家的建议我用排除法找到了染菌的原因,是过滤除菌出问题了

[ Last edited by 随游 on 2010-1-4 at 12:47 ]
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hhaidong

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
随游(金币+2,VIP+0):好的,谢谢,我试试 12-13 12:21
随游(金币+2,VIP+0): 12-13 12:25
过程比较复杂!排除法,取每一步处理完的液体涂平板,观察是否染菌;估计最可能染菌的操作还是过滤。
2楼2009-12-13 12:11:18
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xingrl

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
随游(金币+2,VIP+0): 12-13 12:25
amisking(金币+1,VIP+0): 12-15 08:14
滤膜和滤器及盛装添加物的容器也严格灭菌了吧。
操作过程中手要消毒
3楼2009-12-13 12:22:17
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随游

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by xingrl at 2009-12-13 12:22:
滤膜和滤器及盛装添加物的容器也严格灭菌了吧。
操作过程中手要消毒

恩,都灭过菌了的
滤膜是放在滤器中灭的,用来装灭菌后溶液的空瓶子液灭过菌的
4楼2009-12-13 12:27:23
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杨大妞

新虫 (小有名气)

★ ★
随游(金币+1,VIP+0):恩 是的哦 都是严格灭菌 超净工作台里进行的 12-13 13:49
amisking(金币+1,VIP+0): 12-15 08:14
这些操作要在通风橱里面操作的,在操作之前要打开紫外灭菌一会,再操作的,手也要灭菌
5楼2009-12-13 13:40:20
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hjd_2358

木虫 (小有名气)

★ ★
随游(金币+1,VIP+0):用的是移液管...... 12-14 12:54
amisking(金币+1,VIP+0): 12-15 08:14
想问问你是用枪还是移液管呢?我曾经也出现过这种情况后来发现是由于枪的原因。移液管相对枪来说更可靠。
6楼2009-12-14 08:59:55
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zhang6871

银虫 (正式写手)

★ ★
随游(金币+1,VIP+0):应该不是操作熟练程度吧,已经做了一段时间了,之前也没染过...... 12-14 12:56
amisking(金币+1,VIP+0): 12-15 08:14
想你这种情况的话,如果能够保证所有器具完好灭菌的话,那就应该是操作的问题。操作不熟练,等操作熟练以后就应该不会染菌了。
过于功利,浮躁,布满灰尘的心都是创新的杀手!多记,心静,多动手,贴近大自然!
7楼2009-12-14 09:37:52
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陈思容

铜虫 (正式写手)

★ ★ ★
随游(金币+1,VIP+0):碳源中的葡萄糖会和氮源反应的,如果一起高温灭菌的话 12-14 12:57
amisking(金币+2,VIP+0): 12-15 08:14
为什么C、N不放在一起灭呢,步骤多,灭菌的可能性就高
8楼2009-12-14 10:44:04
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4021435281516

木虫 (小有名气)

★ ★
随游(金币+1,VIP+0):碳源还原性的糖会和氮源反应的...... 12-14 12:57
amisking(金币+1,VIP+0): 12-15 08:13
为什么不把C,N源和其他能放在一起的一起灭菌呢?
减少灭菌环节应该会大大减少染菌的几率!
9楼2009-12-14 12:46:28
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flzt2009

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
随游(金币+2,VIP+0):我也怀疑菌种问题,但又有没染的;氮源就是酵母浸粉;过滤的时候压力一直有的 12-14 17:31
amisking(金币+1,VIP+0): 12-15 08:13
原因分析:菌种是否污染;N源中是否有黄豆饼粉等固形物未完全用水泡透,导致灭菌不彻底;无菌过滤器滤膜破损或在过滤时因压力太大破损;操作问题
10楼2009-12-14 16:24:28
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