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lfgc8505

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有哪位高手知道为什么我的表达载体为什么测序老是测不出来啊啊？请教各�

有哪位高手知道为什么我的表达载体为什么测序老是测不出来啊啊？请教各位虫友！
最近构建了一个表达载体，载体是pET-22b(+),，我的目的基因是hEGF，只有170bp.构建好后，酶切鉴定正确，但是送金斯特测序老是测不出来，新鲜菌液，甘油菌液，质粒全都测不出来，都说测序无信号，或信号差！
用的是通用引物，T7.
请问各位虫友有没有哪位碰到过类似的问题，请各位虫友不吝赐教啊。
谢谢~
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1楼 2009-12-12 23:35:09
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apple-z

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我前一段时间就遇到了类似的情况，用的是公司免费的通用引物 CMV，质粒测序失败。
后来我用了自己的引物，让公司合成引物后再测序，结果测出来了。
有的时候，不知道是公司笨，还是通用的引物就是测不出来。
我建议可以自己设计测序引物，或是用载体说明书上推荐的测序引物。
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3楼2009-12-13 00:56:41
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
贴序列出来撒
有发夹或者高GC侧不过去的
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小木虫之有关部门负责人
2楼2009-12-12 23:49:19
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goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
很有可能是引物的问题。用T7的反向引物侧一下。
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生命的海洋里，我是蓝色的一滴
4楼2009-12-13 01:12:52
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yangguoliguo

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by scelab at 2009/11/02 23:49:
贴序列出来撒
有发夹或者高GC侧不过去的

换一个公司测序，比如宝生物、上海生工、北京天根、北京华大等。
每次测序要分送至少三个公司，来比较。
同意2楼意见！
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天行健，君子以自强不息地势坤，君子以厚德载物
5楼2009-12-13 09:37:25
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