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yzuxhq368

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR

用引物扩增出某基因片,然后插入抗性基因,转化感受态,提质粒,酶切鉴定正确,但用原引物却无法扩增出该含抗性基因的片段,请教高手。
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ln0401

新虫 (初入文坛)

★ ★
yzuxhq368(金币+1):谢谢参与
yzuxhq368(金币+1,VIP+0): 12-11 22:35
这个问题还没遇见过,我以前做的PCR检测结果是对的,但酶切鉴定做不出来。
2楼2009-12-11 09:56:00
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walker2898

银虫 (小有名气)

★ ★
yzuxhq368(金币+1):谢谢参与
yzuxhq368(金币+1,VIP+0): 12-11 22:35
我觉得你的抗性基因是插入的,应该原引物无法扩增出该含抗性基因。
3楼2009-12-11 10:02:54
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antibody01

金虫 (著名写手)

★ ★
yzuxhq368(金币+1):谢谢参与
yzuxhq368(金币+1,VIP+0): 12-11 22:35
同意三楼的
生活就像强奸,无法反抗就要学会享受; 工作就像轮奸,你不行就要别人上; 社会就像自慰,一切都要靠自己的双手解决。
4楼2009-12-11 10:06:05
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bioxixi

木虫 (著名写手)

★ ★
yzuxhq368(金币+1):谢谢参与
yzuxhq368(金币+1,VIP+0): 12-11 22:35
插入抗性基因 是什么意思
你想用原引物扩出来,得保证该抗性基因在两引物之间,也就是你把抗性基因插入到PCR片段中了?
5楼2009-12-11 12:42:04
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liyong1981

金虫 (正式写手)



yzuxhq368(金币+1):谢谢参与
楼主这样的做法,是偶感到匪夷所思,一般来说,我们用得质粒载体都有抗性片段的,你外源基因的插入MCS中,可以扩出来 你把抗性片段插入到你的目的基因里面,是什么用呢????这啥技术?目的是什么?目的片段插入抗性?突变?失活?
6楼2009-12-11 13:12:20
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xiangyuan7816


yzuxhq368(金币+1):谢谢参与
是不是插入的位点不正确呢,不在你扩的片段之间?
7楼2009-12-11 14:08:11
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yzuxhq368

金虫 (小有名气)

通过测序找到原因了,谢谢各位
8楼2009-12-11 22:34:09
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蓝皮鼠7983

至尊木虫 (文坛精英)

飞过蓝天

插到外面去了,肯定
海到尽头天做岸,山登绝顶我为峰。
9楼2009-12-12 00:09:33
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