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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR
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yzuxhq368

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR

用引物扩增出某基因片，然后插入抗性基因，转化感受态，提质粒，酶切鉴定正确，但用原引物却无法扩增出该含抗性基因的片段，请教高手。
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1楼 2009-12-10 22:18:40
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ln0401

新虫 (初入文坛)
★ ★
yzuxhq368(金币+1):谢谢参与
yzuxhq368(金币+1,VIP+0): 12-11 22:35
这个问题还没遇见过，我以前做的PCR检测结果是对的，但酶切鉴定做不出来。
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2楼2009-12-11 09:56:00
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walker2898

银虫 (小有名气)
★ ★
yzuxhq368(金币+1):谢谢参与
yzuxhq368(金币+1,VIP+0): 12-11 22:35
我觉得你的抗性基因是插入的，应该原引物无法扩增出该含抗性基因。
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3楼2009-12-11 10:02:54
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antibody01

金虫 (著名写手)
★ ★
yzuxhq368(金币+1):谢谢参与
yzuxhq368(金币+1,VIP+0): 12-11 22:35
同意三楼的
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生活就像强奸，无法反抗就要学会享受； 工作就像轮奸，你不行就要别人上； 社会就像自慰，一切都要靠自己的双手解决。
4楼2009-12-11 10:06:05
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★ ★
yzuxhq368(金币+1):谢谢参与
yzuxhq368(金币+1,VIP+0): 12-11 22:35
插入抗性基因 是什么意思
你想用原引物扩出来，得保证该抗性基因在两引物之间，也就是你把抗性基因插入到PCR片段中了？
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5楼2009-12-11 12:42:04
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
yzuxhq368(金币+1):谢谢参与
楼主这样的做法，是偶感到匪夷所思，一般来说，我们用得质粒载体都有抗性片段的，你外源基因的插入MCS中，可以扩出来 你把抗性片段插入到你的目的基因里面，是什么用呢？？？？这啥技术？目的是什么？目的片段插入抗性？突变？失活？
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6楼2009-12-11 13:12:20
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xiangyuan7816

★
yzuxhq368(金币+1):谢谢参与
是不是插入的位点不正确呢，不在你扩的片段之间？
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7楼2009-12-11 14:08:11
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yzuxhq368

金虫 (小有名气)
通过测序找到原因了，谢谢各位
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8楼2009-12-11 22:34:09
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蓝皮鼠7983

至尊木虫 (文坛精英)

飞过蓝天
插到外面去了,肯定
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海到尽头天做岸，山登绝顶我为峰。
9楼2009-12-12 00:09:33
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