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guojing0000

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】在线求助关于SDS-page的问题,很着急啊(带图)

我最近在做SDS-PAGE,一直做出来的效果都不理想,想请教大家几个问题:
1. 我要电泳的蛋白质分子量比较小,10-40KD,这是分离胶的配置中需要6M的尿素吗?
2. 我电泳完的胶发现一个特别迷惑的问题。就是前面的带都好好的面比较清晰,但是到后面就特别不清晰了,(如图),想知道这是什么问题
3. 请我我一般改用多大的电流电压跑比较好啊?我定电流8MA效果也不好,定电压140V效果也不好,很迷惑
希望大家给与我多多的指点,我实在是不懂啊~谢谢各位了
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antibody01

金虫 (著名写手)

SDS-PAGE不需要尿素啊
生活就像强奸,无法反抗就要学会享受; 工作就像轮奸,你不行就要别人上; 社会就像自慰,一切都要靠自己的双手解决。
2楼2009-12-09 16:33:07
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jlzkchong

新虫 (初入文坛)

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amisking(金币+1,VIP+0): 12-9 21:35
不知道是不是因为样品中蛋白含量过低,所以后面的条带才不明显的?!你点样的话点多少?是否可以加大点样量或者样品浓度来试试呢~仅供参考哈
3楼2009-12-09 16:34:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


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小分子蛋白,10KDa左右的,都要用变性梯度胶才能做好
4楼2009-12-09 16:39:27
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zhengsimin

金虫 (初入文坛)


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引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-12-9 16:39:
小分子蛋白,10KDa左右的,都要用变性梯度胶才能做好

请问变性梯度胶怎么灌胶,也和非变性一样么?
5楼2009-12-09 16:48:20
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


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引用回帖:
Originally posted by zhengsimin at 2009/12/9, 16:48:



请问变性梯度胶怎么灌胶,也和非变性一样么?

没做过,但是据做过的人说,非常麻烦,他们一般买公司灌好的,但是比较贵
6楼2009-12-09 17:00:01
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)


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是用tricine sds page吧
7楼2009-12-09 21:00:22
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sunysmile

金虫 (初入文坛)

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10~~40KD的蛋白跑15%的胶的就可以了
样品处理的时候加入loading buffer  以后煮5~10分钟
 然后高速离心一下再上样
 
8楼2009-12-09 21:24:15
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

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amisking(金币+2,VIP+0): 12-9 21:35
en,确实可以试试15%的胶
不过还是不行的话,就没必要再增加浓度了,普通PAGE胶的分辨率也就这样了
9楼2009-12-09 21:26:33
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)


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上样之前样品变性了吗? 最好点个marker吧。
10楼2009-12-12 20:47:11
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