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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】在线求助关于SDS-page的问题，很着急啊（带图）
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guojing0000

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】在线求助关于SDS-page的问题，很着急啊（带图）

我最近在做SDS-PAGE，一直做出来的效果都不理想，想请教大家几个问题：
1. 我要电泳的蛋白质分子量比较小，10-40KD，这是分离胶的配置中需要6M的尿素吗？
2. 我电泳完的胶发现一个特别迷惑的问题。就是前面的带都好好的面比较清晰，但是到后面就特别不清晰了，（如图），想知道这是什么问题
3. 请我我一般改用多大的电流电压跑比较好啊？我定电流8MA效果也不好，定电压140V效果也不好，很迷惑
希望大家给与我多多的指点，我实在是不懂啊~谢谢各位了
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1楼 2009-12-09 16:21:03
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antibody01

金虫 (著名写手)
SDS-PAGE不需要尿素啊
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生活就像强奸，无法反抗就要学会享受； 工作就像轮奸，你不行就要别人上； 社会就像自慰，一切都要靠自己的双手解决。
2楼2009-12-09 16:33:07
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jlzkchong

新虫 (初入文坛)
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amisking(金币+1,VIP+0): 12-9 21:35
不知道是不是因为样品中蛋白含量过低，所以后面的条带才不明显的？！你点样的话点多少？是否可以加大点样量或者样品浓度来试试呢~仅供参考哈
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3楼2009-12-09 16:34:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
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小分子蛋白，10KDa左右的，都要用变性梯度胶才能做好
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4楼2009-12-09 16:39:27
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zhengsimin

金虫 (初入文坛)
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引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-12-9 16:39:
小分子蛋白，10KDa左右的，都要用变性梯度胶才能做好

请问变性梯度胶怎么灌胶，也和非变性一样么？
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5楼2009-12-09 16:48:20
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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引用回帖:
Originally posted by zhengsimin at 2009/12/9, 16:48:



请问变性梯度胶怎么灌胶，也和非变性一样么？

没做过，但是据做过的人说，非常麻烦，他们一般买公司灌好的，但是比较贵
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6楼2009-12-09 17:00:01
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)
★
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是用tricine sds page吧
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7楼2009-12-09 21:00:22
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sunysmile

金虫 (初入文坛)
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amisking(金币+1,VIP+0): 12-9 21:35
10~~40KD的蛋白跑15%的胶的就可以了
样品处理的时候加入loading buffer 　以后煮5～１０分钟
　然后高速离心一下再上样
　
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8楼2009-12-09 21:24:15
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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amisking(金币+2,VIP+0): 12-9 21:35
en，确实可以试试15%的胶
不过还是不行的话，就没必要再增加浓度了，普通PAGE胶的分辨率也就这样了
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9楼2009-12-09 21:26:33
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★
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上样之前样品变性了吗? 最好点个marker吧。
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10楼2009-12-12 20:47:11
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