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zhenyiwang木虫 (小有名气)
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【求助/交流】求助测定拟南芥果胶和半乳糖醛酸的测定准确详细方法，回帖准确必给金币
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求助测定拟南芥果胶和半乳糖醛酸的测定准确详细方法，回帖准确必给金币 我想尽快得到答案，请诸位大哥大姐给予帮助，万分感谢！ |
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zhenyiwang(金币+1,VIP+0): 1-16 14:44
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下面是我查到的方法，自己没做过，楼主可以看看，希望能有帮助： 细胞壁成分的分离参考缪颖等(2000)的方法稍作修改。将新鲜材料用去离子水，在0℃下研磨，然后在1 000 g下离心10 min,弃去上清。沉淀部分依次用冰冷的去离子水、丙酮、甲醇:氯仿(1: 1, v/v )充分洗涤，然后在37℃下用a一淀粉酶(EC 3.2.1.1, I-A型，提取自猪的胰腺)处理以除去淀粉，并用碘检测细胞壁部分的淀粉去除的是否完全。此部分冻干即得细胞壁粗提物，并称重。 将细胞壁粗提物在95℃，50 mM EDTA (pH 6.8)提取3次，每次15 min, 即得果胶物质，量体积。细胞壁中的半纤维素分别用4 l (w/v) KOH和24 % (w/v ) KOH(含0.02 Yo NaBH4)提取，提取3次，每次12 ho 4%和24%的KOH提取 物分别定义为半纤维素A类(HA)和半纤维素B类(HB)。半纤维素A和半 纤维素B组在冰浴条件下，用冰乙酸中和，量体积。碱性不溶物质即纤维素类， 用72 0 (v/v)硫酸在25℃下溶解1h，然后稀释30倍。分别测量各组分的总糖 含量和醛酸含量。 11、细胞壁多糖的分析:分别测定细胞壁各个结构组分总糖、醛酸的含量。 总糖含量的测定参考Dubois (1956)的苯酚硫酸方法。1 ml反应液，加入1 ml 7%苯酚溶液，摇匀，加入5 ml浓硫酸，测定490 nm处的吸光度值，用葡萄糖 为标准表示其糖含量。 醛酸含量测定参考Bitter和Muir (1962)的咔唑显色方法。1 ml反应液，加入5ml浓硫酸(含0.025 M的四硼酸钠)，然后沸水浴10 min，加入0.125%的咔唑，沸水浴15 min，测定530 nm处的吸光度值，用半乳糖醛酸为标准表示其醛酸含量。 |
2楼2010-01-11 15:26:44