| 查看: 532 | 回复: 7 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
elalei1999铜虫 (小有名气)
|
[交流]
【求助/交流】克隆目的基因遇阻
|
||
|
在下设计了简并引物，提取植物叶片的RNA，反转录cDNa后，PCR扩Actin，每次都能得到正常的条带，但是加入目的基因引物扩增，要么扩不出东西，要么得到的是引物二聚体。（已采用退火温度梯度） 请大伙给出出主意，我可能是在哪里出了问题。谢谢。 |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有108人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
elalei1999
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 0.4
- 散金: 1
- 红花: 1
- 帖子: 65
- 在线: 32.8小时
- 虫号: 477976
- 注册: 2007-12-14
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
2楼2009-12-09 13:55:31
yangym1123
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1963.2
- 帖子: 230
- 在线: 30.2小时
- 虫号: 397777
- 注册: 2007-06-10
- 专业: 动物形态学及胚胎学
3楼2009-12-09 14:14:10
liyong1981 
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 774.1
- 散金: 116
- 帖子: 905
- 在线: 35.2小时
- 虫号: 357405
- 注册: 2007-04-27
- 性别: GG
- 专业: antibody
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
|
这个问题很多人提出来过，我记得我前阵子回答过， 、你扩出保守基因能说明什么呢？首先你要搞清楚，保守基因在RT实验中的作用，它是一个相对定量的内参，或者说是一个你目的基因表达量的相对参照物，扩出来ACTIN是很容易的事，即使你的反转录效率低，CDNA不完全！ 我建议你，1，重新用MLV做一次RT,记住这步很关键， 2，在第一步仔细的基础上，重新设计下引物 ，引物这东西有时候就是很奇怪的，多试试吧， 3.植物的我以前做过，如果你只是在EST重设计一段引物看表达量的话，应该很容易做，如果做RACE或者其他，那就费点事了，慢慢来 4，有引物二聚体说明你体系基本问题不大 5，RT后的第一链CDNA，要注意保存好，最好立马就做扩增，因为你也知道，DNA单链不稳定的，或者你费点事，RT的时候做成双链的 6.希望对你有帮助 |
4楼2009-12-09 14:16:31
yzhang1986
铁杆木虫 (文坛精英)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 贵宾: 1.497
- 金币: 7998.7
- 散金: 299
- 红花: 5
- 帖子: 17111
- 在线: 142.9小时
- 虫号: 668685
- 注册: 2008-12-05
5楼2009-12-09 14:35:03
6楼2009-12-09 16:40:12
liyong1981
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 774.1
- 散金: 116
- 帖子: 905
- 在线: 35.2小时
- 虫号: 357405
- 注册: 2007-04-27
- 性别: GG
- 专业: antibody
7楼2009-12-10 08:15:21
elalei1999
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 0.4
- 散金: 1
- 红花: 1
- 帖子: 65
- 在线: 32.8小时
- 虫号: 477976
- 注册: 2007-12-14
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
8楼2009-12-10 14:55:39