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elalei1999

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】克隆目的基因遇阻

在下设计了简并引物,提取植物叶片的RNA,反转录cDNa后,PCR扩Actin,每次都能得到正常的条带,但是加入目的基因引物扩增,要么扩不出东西,要么得到的是引物二聚体。(已采用退火温度梯度)
请大伙给出出主意,我可能是在哪里出了问题。谢谢。
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不抛弃,不放弃!
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yangym1123

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
退火温度具体是多少呢,兼并引物的退火温度可以降低到45度或者更低试试,先出现条带再说了!actin扩出条带,一般说是28个循环可以扩增得到很亮的条带说明反转录没有问题,如果再扩不出来,试试巢式PCR或者可能是引物不好!祝你好运哦!
3楼2009-12-09 14:14:10
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