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汕头大学海洋科学接受调剂
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melodyxin

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于PCR条件的优化!(有弥散)

如图,是我的PCR结果。

上面那条带是我要的目的片段,下面的是非特异性片段。

很郁闷啊,目的片段周围糊糊的,感觉有弥散且有杂带。本来想要切胶回收,但这种情况感觉回收回来的条带会非常不纯。

基本情况:是从已有的质粒上面扩增其中一段。其中下游引物是之前用过的,完全匹配,其Tm值在63度;而上游引物是自己设计的,还引入了酶切位点。如果删去需引入的酶切位点,其Tm大概才45度,但加上引入的酶切位点,该引物的Tm也是63度。

现在的PCR条件是50度,如果升到55度,则P不出目的条带,在该大小附近几乎都是弥散状的条带。

请大家指点一二!!!


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yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by melodyxin at 2009-12-8 20:40:

你是说对退火温度做梯度么?

当然啦
7楼2009-12-08 20:56:26
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xiaoli9390

金虫 (初入文坛)

amisking(金币+0,VIP+0):这段时间附件功能不能用,不过马上就会修复。 12-8 20:13
看不到你的图片啊
2楼2009-12-08 20:05:11
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melodyxin

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xiaoli9390 at 2009-12-8 20:05:
看不到你的图片啊

amisking(金币+0,VIP+0):这段时间附件功能不能用,不过马上就会修复。
3楼2009-12-08 20:15:30
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amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by melodyxin at 2009-12-8 20:15:

amisking(金币+0,VIP+0):这段时间附件功能不能用,不过马上就会修复。

我给他评分以后他会收到那条信息的。
如果没有人帮助你,那么你就去帮助别人。
4楼2009-12-08 20:24:17
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