应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于PCR条件的优化！（有弥散）
91/1返回列表
查看: 589  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

melodyxin

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于PCR条件的优化！（有弥散）

如图，是我的PCR结果。

上面那条带是我要的目的片段，下面的是非特异性片段。

很郁闷啊，目的片段周围糊糊的，感觉有弥散且有杂带。本来想要切胶回收，但这种情况感觉回收回来的条带会非常不纯。

基本情况：是从已有的质粒上面扩增其中一段。其中下游引物是之前用过的，完全匹配，其Tm值在63度；而上游引物是自己设计的，还引入了酶切位点。如果删去需引入的酶切位点，其Tm大概才45度，但加上引入的酶切位点，该引物的Tm也是63度。

现在的PCR条件是50度，如果升到55度，则P不出目的条带，在该大小附近几乎都是弥散状的条带。

请大家指点一二！！！


回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-12-08 19:58:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoli9390

金虫 (初入文坛)
amisking(金币+0,VIP+0):这段时间附件功能不能用，不过马上就会修复。 12-8 20:13
看不到你的图片啊
赞一下(20人) 回复此楼
2楼2009-12-08 20:05:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melodyxin

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xiaoli9390 at 2009-12-8 20:05:
看不到你的图片啊

amisking(金币+0,VIP+0):这段时间附件功能不能用，不过马上就会修复。
赞一下 回复此楼
3楼2009-12-08 20:15:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by melodyxin at 2009-12-8 20:15:

amisking(金币+0,VIP+0):这段时间附件功能不能用，不过马上就会修复。

我给他评分以后他会收到那条信息的。
赞一下(1人) 回复此楼
如果没有人帮助你，那么你就去帮助别人。
4楼2009-12-08 20:24:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 12-8 20:46
做个梯度
不行的话重新设计引物
赞一下(21人) 回复此楼
5楼2009-12-08 20:37:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melodyxin

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yzhang1986 at 2009-12-8 20:37:
做个梯度
不行的话重新设计引物

你是说对退火温度做梯度么？
赞一下 回复此楼
6楼2009-12-08 20:40:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by melodyxin at 2009-12-8 20:40:

你是说对退火温度做梯度么？

当然啦
回复此楼
7楼2009-12-08 20:56:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jlzkchong

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 12-8 21:33
你可以先用45度做5个循环，再将退火温度提高到63度。做25个循环，试一试吧~非特异条带说明你的引物特异性不好。先试试，不行就再重新设计上游引物吧~
赞一下(21人) 回复此楼
8楼2009-12-08 21:05:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melodyxin

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jlzkchong at 2009-12-8 21:05:
你可以先用45度做5个循环，再将退火温度提高到63度。做25个循环，试一试吧~非特异条带说明你的引物特异性不好。先试试，不行就再重新设计上游引物吧~

好的！多谢呐！
回复此楼
9楼2009-12-08 21:21:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 melodyxin 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[考研] 一志愿中科大材料与化工，353分还有调剂学校吗 +10 否极泰来2026 2026-04-15 12/600 2026-04-17 17:54 by mapenggao
[考研] 297，工科调剂?河南农业大学本科 +14 河南农业大学-能 2026-04-14 14/700 2026-04-16 14:41 by dingyanbo1
[考博] 申博自荐 +3 Linxia林夏 2026-04-13 3/150 2026-04-16 12:55 by 墨荷之露
[基金申请] RY：中国产出的科学垃圾论文，绝对数量和比例都世界第一 +7 zju2000 2026-04-14 18/900 2026-04-16 11:36 by 欢乐颂叶蓁
[考研] 327求调剂 +26 Xxjc1107. 2026-04-13 29/1450 2026-04-16 10:52 by Espannnnnol
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+7 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 29/1450 2026-04-16 09:00 by screening
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +4 白云123456789 2026-04-13 4/200 2026-04-16 00:18 by 粉沁若尘
[考研] 一志愿A区211，22408 321求调剂 +6 随心所欲☆ 2026-04-15 7/350 2026-04-15 21:45 by lbsjt
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +9 lzmk 2026-04-14 10/500 2026-04-15 20:02 by 学员JpLReM
[考研] 通信工程求调剂！！！ +6 zlb770521 2026-04-14 6/300 2026-04-15 20:00 by 学员JpLReM
[考研] 药学求调剂 +11 RussHu 2026-04-12 13/650 2026-04-15 19:07 by zhuwenxu
[考研] 0854调剂 +13 长弓傲 2026-04-12 16/800 2026-04-15 13:45 by fenglj492
[考研] 085801电气专硕272求调剂 +19 电气李 2026-04-13 21/1050 2026-04-15 13:37 by 黑科技矿业
[考研] 各位老师好，求调剂，本科211，一志愿天津大学生物与医药学硕，差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[考研] 一志愿浙大生物325分求调剂 +9 zysheng 2026-04-12 9/450 2026-04-12 22:31 by yuyin1233
[考研] 346分，工科0854求调剂，专硕 +6 moser233 2026-04-12 7/350 2026-04-12 22:11 by fqwang
[考研] 调剂结束 +6 floriea 2026-04-12 8/400 2026-04-12 18:13 by zhouxiaoyu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭