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【求助/交流】关于PCR条件的优化！（有弥散）
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如图，是我的PCR结果。 上面那条带是我要的目的片段，下面的是非特异性片段。 很郁闷啊，目的片段周围糊糊的，感觉有弥散且有杂带。本来想要切胶回收，但这种情况感觉回收回来的条带会非常不纯。 基本情况：是从已有的质粒上面扩增其中一段。其中下游引物是之前用过的，完全匹配，其Tm值在63度；而上游引物是自己设计的，还引入了酶切位点。如果删去需引入的酶切位点，其Tm大概才45度，但加上引入的酶切位点，该引物的Tm也是63度。 现在的PCR条件是50度，如果升到55度，则P不出目的条带，在该大小附近几乎都是弥散状的条带。 请大家指点一二！！！  |
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