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tancf

金虫 (小有名气)

[交流] his标签如何切去?

蛋白上有his标签,想把它切去(买了sigma的凝血酶(T4648),粉末).具体在实验的时候该怎么操作呢?比如说,蛋白在NI柱上的时候切吗?该用怎样的酶切体系?时间、温度、pH?希望有经验的虫虫不吝赐教!
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qingfengwu

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
tancf(金币+3,VIP+0):谢谢! 12-11 14:55
酶切后加入20mMimidazole,再过金属鳌合柱收流穿,再浓缩看看;EK不太专一,如果杂带是目标蛋白的降解那就比较麻烦,很难去除。

酶切的时候最好把咪唑透析掉(加酶后透析),咪唑可能会影响酶切效率
6楼2009-12-04 13:47:21
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查看全部 8 个回答

lzhwin

木虫 (正式写手)


tancf(金币+1,VIP+0): 12-4 10:32
his标签很小好像可以不切吧?对你试验很有影响吗?如果选择切掉的话还要再做一次蛋白纯化才能用。
2楼2009-12-04 10:05:30
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tancf

金虫 (小有名气)

嗯,得切去,这个标签对我下面的时候有影响。
3楼2009-12-04 10:33:59
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)

不太懂,为什么不改造表达载体,使其没有his部分
4楼2009-12-04 10:58:41
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