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huoshd

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助交流】为什么要做荧光定量PCR？

各位大虾，本人刚刚涉足分子生物学这个领域，看了一些东西，各位能不能告诉我为什么要做荧光定量PCR？荧光定量PCR能应用在那些方面？荧光定量PCR的原理？最好能举例说明下。
在这先谢谢，

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1楼2009-11-28 13:09:43

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09021122

木虫 (正式写手)

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荧光定量PCR：通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品的初始模版。
　　原理： PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。