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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 872898
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专业: 肿瘤免疫

[交流] 倒换质粒载体流程求助~~

刚刚接触基因工程，课题与原核表达相关，指导教师提示我需要将载体PET32a上一段融合基因倒换到PQE30上，大概的说了一些酶切位点选择方面等等一些问题，我已经记不清楚了，希望大家能帮帮我，提供些资料，还有我要是最近开始实验，这几天应该恶补那方面的知识呢，谢谢大家，对于给我帮助大的人，给予10G奖励。

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1楼 2009-11-23 17:28:01

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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖甜到憂傷

BioEPI: 8
应助: 130 (高中生)
贵宾: 0.008
金币: 4738.3
散金: 2273
红花: 56
帖子: 2308
在线: 740.7小时
虫号: 642666
注册: 2008-11-01
性别: GG
专业: 有机合成

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
jiangkuo0520(金币+9,VIP+0):谢谢你 11-24 08:23

基本步骤是：
1、连有你目的基因的PET32a双酶切，电泳，回收目的片段。电泳检测回收片段的浓度。
2、载体PQE30双酶切，电泳，回收。电泳检测回收载体浓度。
3、针对回收的目的片段和载体的浓度选择合适的量进行连接。
4、连接产物转化感受态DH5a，涂板，做蓝白斑筛选。
5、挑白斑做菌液pcr鉴定，筛选阳性克隆。
6、保险起见，提质粒做双酶切鉴定，测序。
多看看书，向做过的师兄师姐多请教。