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汕头大学海洋科学接受调剂
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

[交流] 倒换质粒载体流程求助~~

刚刚接触基因工程,课题与原核表达相关,指导教师提示我需要将载体PET32a上一段融合基因倒换到PQE30上,大概的说了一些酶切位点选择方面等等一些问题,我已经记不清楚了,希望大家能帮帮我,提供些资料,还有我要是最近开始实验,这几天应该恶补那方面的知识呢,谢谢大家,对于给我帮助大的人,给予10G奖励。
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


jiangkuo0520(金币+1,VIP+0): 11-23 18:51
你导师意思大概是,选择合适的酶切位点将载体PET32a上的目的基因切下连到载体PQE30上,所选择的酶切位点应该在这两个载体上都存在,且不能让让基因出现移位。看看基因工程或者分子克隆。

[ Last edited by susizheng on 2009-11-23 at 18:41 ]
Thank-you,so-blue.
2楼2009-11-23 18:39:43
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

不知道有没有人做过啊,我想知道些具体过程啊,谢谢大家!
3楼2009-11-23 18:52:17
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

继续等专家们指点~
4楼2009-11-23 20:05:03
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
jiangkuo0520(金币+9,VIP+0):谢谢你 11-24 08:23
基本步骤是:
1、连有你目的基因的PET32a双酶切,电泳,回收目的片段。电泳检测回收片段的浓度。
2、载体PQE30双酶切,电泳,回收。电泳检测回收载体浓度。
3、针对回收的目的片段和载体的浓度选择合适的量进行连接。
4、连接产物转化感受态DH5a,涂板,做蓝白斑筛选。
5、挑白斑做菌液pcr鉴定,筛选阳性克隆。
6、保险起见,提质粒做双酶切鉴定,测序。
多看看书,向做过的师兄师姐多请教。
Thank-you,so-blue.
5楼2009-11-23 21:35:06
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-11-23 21:35:
基本步骤是:
1、连有你目的基因的PET32a双酶切,电泳,回收目的片段。电泳检测回收片段的浓度。
2、载体PQE30双酶切,电泳,回收。电泳检测回收载体浓度。
3、针对回收的目的片段和载体的浓度选择合适的量进行 ...

好详细,谢谢了,新人就是需要这样的指导!
6楼2009-11-24 08:23:55
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